La transcriptase inverse (RT) Thermo Scientific Maxima H Minus a été développée par évolution in vitro de la RT M-MuLV. L’enzyme possède une activité de polymérase dépendante de l’ARN et dépendante de l’ADN mais ne présente aucune activité de RNase H en raison d’une mutation du domaine de RNase H de la RT M-MuLV. Cette enzyme issue du génie génétique offre une thermostabilité et une robustesse considérablement améliorées, une processivité 50X supérieure ainsi qu’un taux de synthèse accru par rapport au type de RT M-MuLV primitive.

La suppression de l’activité de RNase H permet à l’enzyme de produire de très longs transcrits d’ARN jusqu’à 20 kb. En raison de sa thermostabilité élevée, l’enzyme conserve son activité pendant toute la réaction de transcription inverse et génère des rendements élevés d’ADNc. La température de la réaction peut être augmentée jusqu’à 65°C pour une transcription efficace des régions d’ARN présentant un degré élevé de structure secondaire ou pour améliorer la spécificité à l’aide d’amorces spécifiques de certains gènes. La processivité extrêmement élevée de l’enzyme Maxima H Minus augmente la résistance aux inhibiteurs de réaction courants, tels que la guanidine, le formamide et l’éthanol.

Points clés

• Thermostable : 90 % d’activité après incubation à 50°C pendant 60 minutes dans un mélange de réactions.
• Active jusqu’à 65°C
• Hauts rendements d’ADNc de pleine longueur jusqu’à 20 kb
• Haute sensibilité : synthèse d’ADNc reproductible à partir d’une large gamme de quantités d’ARN total de départ (1 pg à 5 µg)
• Efficace : synthèse d’ADNc conplète en 15 à 30 minutes
• Une résistance aux inhibiteurs de réaction courants accrue
• Incorpore des nucléotides modifiés

Applications

• Synthèse d’ADNc premier brin pour la RT-PCR et la RT-PCR en temps réel.
• Transcription inverse à des températures élevées pour réduire les effets de la structure secondaire.
• Synthèse de l’ADNc pour le clonage et l’expression
• Génération de sondes d’ADNc marquées pour microarrays
• Analyse de l’ARN par extension d’amorce.

Remarque
• Également disponible : : Kit de synthèse d’ADNc premier brin Maxima H Minus.