Thermo Scientific™

SfiI (10 U/μL)

5’ G G C C N N N N ↓N G G C C 3’ 3’ C C G GAfficher plus

Référence	Quantité
ER1821	1 000 unités

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Prix (EUR)

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Quantité:

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5’ G G C C N N N N ↓ N G G C C 3’
3’ C C G G N ↑ N N N N C C G G 5’

L’enzyme de restriction Thermo Scientific SfiI reconnaît les sites GGCCNNNN^NGGCC et sa coupe est optimale à 50°C dans le tampon G. Reportez-vous aux Conditions de réaction des enzymes de restriction pour disposer d’un tableau sur l’activité enzymatique, les conditions de double digestion, et l’inactivation par la chaleur pour cette enzyme de restriction et d’autres. Remarque : Également disponible en tant qu’enzyme FastDigest pour une digestion rapide de l’ADN.

Les endonucléases de restriction classique Thermo Scientific sont une grande collection d’enzymes de restriction de haute qualité, optimisées pour fonctionner dans l’un des tampons du système à cinq tampons. En outre, le tampon Tango universel est fourni pour des raisons de commodité dans les digestions doubles. Toutes les enzymes présentent une activité de 100 % dans le tampon et les conditions de réaction recommandés. Pour garantir une performance constante, les tampons de réaction d’enzymes de restriction Thermo Scientific contiennent de la BSA prémélangée, qui améliore la stabilité de nombreuses enzymes et lie les contaminants qui peuvent être présents dans les préparations d’ADN.

Caractéristiques

• Qualité supérieure : contrôle qualité rigoureux et processus de fabrication de pointe
• Système à cinq tampons avec code couleur pratique
• Comprend un tampon Tango universel pour les digestions doubles
• BSA prémélangé dans des tampons de réaction
• Large sélection de spécificités d’endonucléases de restriction

Applications

• Clonage moléculaire
• Cartographie des sites de restriction
• Génotypage
• Transfert Southern
• Polymorphisme de longueur des fragments de restriction (RFLP)
• SNP

Remarque : Dosé à l’aide d’ADN pUC19 avec insert contenant deux sites SfiI issus d’ADN d’adénovirus 2. L’incubation à 37°C se traduit par une activité de 10 %. Le clivage SfiI est affecté par le chevauchement avec la méthylation dcm. Pour éviter la méthylation dcm, utilisez une souche dam-, dcm-, telle que la souche GM2163. Au moins deux copies de la séquence de reconnaissance SfiI sont nécessaires pour le clivage. Les deux sites peuvent se trouver sur des molécules d’ADN identiques ou différentes. (L. M. Wertzell et al., J. Mol. Biol., 248, 581-595, 1995.) Par conséquent, un oligonucléotide comportant un site de reconnaissance SfiI peut être ajouté en complément. Pour la sensibilité à la méthylation, se référer aux caractéristiques du produit.

Usage exclusivement réservé à la recherche. Ne pas utiliser pour des procédures de diagnostic.

Spécifications

Tampon compatibleTampon 10X G

Type de produitEnzyme de restriction

Quantité1 000 unités

Concentration10 U/μl

EnzymesSfiI

Sensibilité à la méthylationSensible à la méthylation CpG, non sensible à la méthylation CpG, non sensible à la méthylation dam, non sensible à la méthylation CpG, non sensible à la méthylation dam

Température de réaction optimale50°C

Catégorie de rechercheClonage traditionnel

Sensible à l’inactivation thermiqueNon

Enzymes de restriction de type IISNon

Unit SizeEach

Foire aux questions (FAQ)

Can I double digest my DNA using a Thermo Scientific conventional restriction enzyme and a FastDigest restriction enzyme?

For optimal results with fast reaction and 100% buffer compatibility, we highly recommend using FastDigest restriction enzymes in double digestion. In certain cases however, it may be possible to perform double digestion using a mix of Thermo Scientific conventional and Fastdigest restriction enzymes. For specific recommendations, please contact our technical service with detailed information about the enzymes and DNA template you plan to use.

Why do you recommend only 2 µL of 10X Reaction Buffer when digesting unpurified PCR product in a 30 µL reaction?

We recommend only 2 µl 10X Buffer in digestion of unpurified PCR products in 30 ul since salts and ions from the PCR reaction would be carried over to the digestion reaction.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Restriction Enzyme Cloning Support Center.

What are key factors promoting star activity?

Star activty may be contributed by:

• Prolonged incubation
• High enzyme concentration
• High glycerol concentration (usually 5% or higher)
• Small reaction volume

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Restriction Enzyme Cloning Support Center.

Unexpected DNA bands were observed on agarose gel electrophoresis after restriction digestion. What may have caused this?

Unexpected cleavage patterns may be caused by the following reasons:

• Star activity of the restriction enzyme: Make sure to follow the reaction recommendations as specified in the protocol. Star activity may be improved by changing several key factors such as decreasing the reaction time, increasing the reaction volume, and decreasing the enzyme amount.

• Partial or incomplete cleavage (incomplete restriction reaction): Efficiency of the enzyme can be improved by adding more enzyme, prolonging the reaction time, or purifying DNA samples to remove inhibitory contaminants.

• Contamination with non-specific endonucleases: Non-specific endonucleases may be introduced to the DNA sample and/or the enzyme from improper handling, pipetting, etc.

•Improper reaction setup: Mix the digestion reaction thoroughly.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within ourRestriction Enzyme Cloning Support Center.

What are possible reasons for incomplete/failed restriction digestion?

The main reason for DNA cleavage reaction failure is the presence of contaminating inhibitors in the template DNA (for example: phenol, chloroform, detergents, ethanol, excess salts, EDTA, etc.). The best way to troubleshoot is to perform control reactions:

1) negative control (experimental DNA in the reaction buffer without the restriction enzyme) to access degradation of DNA by contaminants in the DNA template and/or reaction buffer
2) positive control reaction I (digestion of highly pure control DNA with the restriction enzyme) to access reaction conditions and enzyme activity
3) positive control reaction II (highly pure control DNA + experimental DNA + Restriction Enzyme) to access possible issues with the experimental DNA.

In addition, please check for sensitivity of the restriction enzymes to template DNA methylation.

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