Citations et références (323)

Invitrogen™

Fluo-4, AM, perméant aux cellules

Les indicateurs marqués de calcium sont des molécules qui affichent une hausse de fluorescence lors de la liaison du Ca2+.Afficher plus

Référence	Quantité
F14201	10 x 50 μg

Référence F14201

Prix (EUR)

530,00

Quantité:

10 x 50 μg

Prix (EUR)

530,00

Les indicateurs marqués de calcium sont des molécules qui affichent une hausse de fluorescence lors de la liaison du Ca²⁺. Fluo-3 a été utilisé pour illustrer les dynamiques spatiales de la signalisation de Ca²⁺, dans les expériences par cytométrie de flux impliquant la photoactivation des chélateurs en cage, des seconds messagers et des neurotransmetteurs, et pour l’analyse pharmacologique cellulaire. Fluo-4 est un élément analogique de fluo-3 avec deux substituants de chlore remplacés par des fluorines, ce qui se solde par une excitation accrue de la fluorescence à 488 nm et ainsi des signaux supérieurs de fluorescence. Les cellules peuvent être chargées d’esters AM de ces indicateurs de calcium en ajoutant l’indicateur dissous directement aux boîtes de culture contenant les cellules cultivées. Ces indicateurs sont utiles pour les applications de fluorescence et de microscopie confocale, de cytométrie en flux et de criblage sur microplaques.

En savoir plus sur les indicateurs ioniques, y compris les indicateurs de potentiel de calcium, de potassium, de pH et de membrane ›

Indicateur de calcium (AM Ester) Spécifications :
• Marquage (Ex/Em de Ca²⁺–forme liée) : Fluo-4 (494/506 nm)
• Augmentation de l’intensité de fluorescence lors de la liaison Ca²⁺ : > 100 fois
• K_d pour Ca²⁺ dans le tampon : ∼335 nM
• Démontrez une augmentation de la fluorescence lors de la liaison de Ca²⁺ avec peu de changement de longueur d’onde

Utilisation de TPEN pour contrôler les cations de métaux lourds
Par ailleurs, des indicateurs basés sur BAPTA tels que ceux-ci se lient à divers cations de métaux lourds (p. ex. Mn²⁺, Zn²⁺, Pb²⁺) avec une affinité nettement plus élevée que le Ca²⁺. Les perturbations des mesures du calcium, causées par la présence de ces ions, peuvent être contrôlées à l’aide du chélateur sélectif de métaux lourds TPEN.

Plus de choix pour les indicateurs fluorescents de calcium
Nous proposons une large sélection d’indicateurs de calcium Molecular Probes™ à utiliser dans divers scénarios expérimentaux. Pour en savoir plus, voir Indicateurs fluorescents de Ca²⁺ excités avec la lumière visible—- Section 19.3 dans le mode d’emploi du capteur Molecular Probes™.

Pour en savoir plus sur les indicateurs excitables par UV de Ca²⁺, les indicateurs protéiques de Ca²⁺, les conjugués des indicateurs de Ca²⁺ et les indicateurs de la fluorescence des autres ions métalliques (comme Mg²⁺, Zn²⁺), consultez les Indicateurs pour Ca²⁺, Mg²⁺, Zn²⁺ et autres ions métalliques - Chapitre 19 dans le manuel Molecular Probes™.

Nous recommandons de dissoudre dans du DMSO anhydre de haute qualité pour les concentrations mères de 1 à 5 mM.

Usage exclusivement réservé à la recherche. Ne pas utiliser pour des procédures de diagnostic.

Spécifications

Méthode de détectionFluorescence, Fluorescent

Type de colorantFluorescent à base de colorants

Excitation / émission494/506 nm

Quantité10 x 50 μg

Conditions d’expéditionTempérature ambiante

À utiliser avec (application)Cell Viability, Prolifération cellulaire, Imagerie cellulaire

À utiliser avec (équipement)Microscope confocal, microscope à fluorescence, instrument à haut contenu, lecteur HTS, lecteur de microplaques, imageur fluorescent, Microscope confocal, Microscope à fluorescence, Instruments d’analyse à haut contenu, Lecteur HTS, Lecteur de microplaques, Imageur fluorescent

Type de produitColorant

Unit SizeEach

Contenu et stockage

Stocker au congélateur (entre -5°C et -30°C) à l’abri de la lumière.

Foire aux questions (FAQ)

Can I fix my cells after loading with Fluo-4 AM dye for the detection of calcium?

No. Since Fluo-4 AM isn't covalently bound to any cellular components and fixation compromises the membrane, the dye would not be retained by the cell.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Cell Analysis Support Center.

I am doing calcium flux imaging with your Fura-2 calibration kit, but am seeing a large variability in ratio in different places around the slide. I am correcting for uniform illumination, using the product as directed, and sealing the coverslip with nail polish.

The nail polish may be the problem. The K_d value (calcium sensitivity) changes depending upon the dye's environment. Nail polish has solvents that can leech under the coverslip and cause variability. We recommend either going without a sealing or sealing with melted paraffin painted on the coverslip edges with a cotton-tipped applicator (paraffin is hydrophobic and has no solvents).

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I need to label cells with Fluo-4, AM, for a calcium flux assay. How long after labeling will the dye be retained?

After loading dye into the cells, intracellular esterases remove the 'AM' moiety from the dye. When the 'AM' group is removed, the dye is able to bind calcium and fluoresce. Since the dye is not covalently bound to any cellular components, it may be actively effluxed from the cell. The rate of efflux is dependent upon the inherent properties of the cell, culture conditions and other factors. The dye may be retained for hours, days or even weeks or lost in a matter of minutes. The use of Probenecid (Cat. No. P36400) limits loss by active efflux.

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Why don't I see a significant change in signal for my live-cell fluorescent indicator dye?

Regardless of the type of live-cell indicator dye (e.g., calcium indicators, pH indicator, metal ion indicators), make sure there is no serum during the loading step, which can prematurely cleave dyes with AM esters and bind dyes non-specifically. Always optimize the dye concentration and staining time with a positive control before you run your test samples, to give the best signal-to-background. Always run a positive control with a buffer containing free ions of known concentration and an ionophore to open pores to those ions (for instance, for calcium indicators like Fluo-4 AM, this would include a buffer with added calcium combined with calcimycin, or for pH indicators, buffers of different pHs combined with nigericin). Reactive oxygen indicators, such as CellROX Green or H2DCFDA would require a cellular reactive oxygen species (ROS) stimulant as a positive control, such as menadione. Finally, make sure your imaging system has a sensitive detector. Plate readers, for instance, have much lower detector efficiency over background, compared to microscopy or flow cytometry.

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Citations et références (323)

Citations et références

Abstract

Functional implications of calcium permeability of the channel formed by pannexin 1.

Authors:Vanden Abeele F,Bidaux G,Gordienko D,Beck B,Panchin YV,Baranova AV,Ivanov DV,Skryma R,Prevarskaya N

Journal:The Journal of cell biology

PubMed ID:16908669

Although human pannexins (PanX) are homologous to gap junction molecules, their physiological function in vertebrates remains poorly understood. Our results demonstrate that overexpression of PanX1 results in the formation of Ca(2+)-permeable gap junction channels between adjacent cells, thus, allowing direct intercellular Ca(2+) diffusion and facilitating intercellular Ca(2+) wave propagation. More ... More

Impaired insulin secretion and glucose intolerance in synaptotagmin-7 null mutant mice.

Authors:Gustavsson N,Lao Y,Maximov A,Chuang JC,Kostromina E,Repa JJ,Li C,Radda GK,Südhof TC,Han W

Journal:Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America

PubMed ID:18308938

Vertebrates express at least 15 different synaptotagmins with the same domain structure but diverse localizations and tissue distributions. Synaptotagmin-1,-2, and -9 act as calcium sensors for the fast phrase of neurotransmitter release, and synaptotagmin-12 acts as a calcium-independent modulator of release. The exact functions of the remaining 11 synaptotagmins, however, ... More

High-throughput microfluidic mixing and multiparametric cell sorting for bioactive compound screening.

Authors:Young SM, Curry MS, Ransom JT, Ballesteros JA, Prossnitz ER, Sklar LA, Edwards BS

Journal:J Biomol Screen

PubMed ID:15006133

HyperCyt, an automated sample handling system for flow cytometry that uses air bubbles to separate samples sequentially introduced from multiwell plates by an autosampler. In a previously documented HyperCyt configuration, air bubble separated compounds in one sample line and a continuous stream of cells in another are mixed in-line for ... More

Drosophila Hsc70-4 is critical for neurotransmitter exocytosis in vivo.

Authors:Bronk P, Wenniger JJ, Dawson-Scully K, Guo X, Hong S, Atwood HL, Zinsmaier KE

Journal:Neuron

PubMed ID:11395008

'Previous in vitro studies of cysteine-string protein (CSP) imply a potential role for the clathrin-uncoating ATPase Hsc70 in exocytosis. We show that hypomorphic mutations in Drosophila Hsc70-4 (Hsc4) impair nerve-evoked neurotransmitter release, but not synaptic vesicle recycling in vivo. The loss of release can be restored by increasing external or ... More

Multiplex GPCR assay in reverse transfection cell microarrays.

Authors:Mishina YM, Wilson CJ, Bruett L, Smith JJ, Stoop-Myer C, Jong S, Amaral LP, Pedersen R, Lyman SK, Myer VE, Kreider BL, Thompson CM

Journal:J Biomol Screen

PubMed ID:15140381

'G protein-coupled receptors (GPCRs) are a superfamily of proteins that include some of the most important drug targets in the pharmaceutical industry. Despite the success of this group of drugs, there remains a need to identify GPCR-targeted drugs with greater selectivity, to develop screening assays for validated targets, and to ... More

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