L’ADN polymérase Thermo Scientific Phusion haute fidélité représente une méthode de référence pour la PCR haute performance. Grâce à un taux d’erreur 50 fois inférieur à celui de Taq et 6 fois inférieur à celui de Pfu, l’ADN polymérase Phusion haute fidélité est excellente pour le clonage et d’autres applications exigeant une haute fidélité. Les ADN polymérases Phusion offrent une performance fiable avec des délais courts de protocoles, même avec des inhibiteurs PCR. Elles produisent de meilleurs rendements avec des quantités réduites d’enzymes que les autres ADN polymérases.

Points forts

• Réaction configurée à température ambiante
• Aucune amplification non spécifique et dégradation de l’amorce pendant la configuration de la réaction
• Réactivation à temps zéro en raison de la technologie de démarrage à chaud unique
• Haute fidélité (52X Taq)
• PCR rapide en raison de temps d’extension courts (15 à 30 s/kb)
• Réactions robustes, optimisation minimale nécessaire
• Rendement accru du produit avec des quantités d’enzymes minimales
• Disponibles sous forme de tampon Green permettant un chargement direct sur les gels (F-566S ou F-566L)

Avec l’ADN polymérase Phusion Hot Start II haute fidélité, l’amplification se fait sans formation de produits non spécifiques grâce à la combinaison de l’ADN polymérase Phusion et d’un ligand Affibody spécifique, se liant de manière réversible, qui inhibe l’activité de l’ADN polymérase à température ambiante. Le ligand Affibody inhibe également l’activité exonucléase 3´ → 5´ de la polymérase, empêchant ainsi la dégradation des amorces et du modèle d’ADN durant l’installation de la réaction. Le ligand est libéré à des températures qui stimulent l’activité de la polymérase, cette dernière devenant pleinement active. L’ADN polymérase Phusion Hot Start II est immédiatement réactivée à hautes températures, elle ne requiert donc aucune étape d’activation séparée dans les protocoles de PCR. Le mélange Phusion Hot Start II High-Fidelity PCR Master Mix est un mélange 2X pratique conçu pour minimiser le nombre d’étapes de pipetage. Le mélange Master Mix contient de l’ADN polymérase Phusion Hot Start II, des nucléotides et un tampon de réaction optimisé incluant du MgCl₂. Seuls le modèle et les amorces doivent être ajoutés à la réaction PCR.

Applications

• PCR haute fidélité
• Haut débit
• Amplification de modèles difficiles (riches en GC)
• Génération de modèle à des fins de séquençage
• PCR Multiplex
• PCR longue portée
• Clonage
• Mutagénèse
• Microarray

Utilisation des ADN polymérases Phusion
Les règles d’hybridation des ADN polymérases Phusion sont différentes de celles de nombreuses ADN polymérases courantes (telles que les ADN polymérases Taq). Pour des résultats optimaux, utilisez notre calculatrice de Tm à l’adresse www.thermofisher.com/tmcalculator.