T-REx™ Core Kit, with pcDNA™4/TO Vector

Système d’expression régulé par tétracycline sans transactivateurs viraux
Le système T-REx™ fournit des niveaux d’expression induite plus élevés que tout autre système d’expression de cellules de mammifères régulé. Il utilise le promoteur CMV complet et ajoute des éléments de contrôle provenant de l’opéron de résistance à la tétracycline bactérienne pour réprimer et déréprimer efficacement la transcription d’une des séquences de promoteur de mammifères les plus fortes connues (1,2).

Activation spécifique
Le système T-REx™ utilise un mécanisme répresseur qui bloque la transcription du puissant promoteur CMV en l’absence de tétracycline. Comme les éléments du système T-REx™ n’utilisent pas de transactivateurs viraux, vous pouvez obtenir une expression de haut niveau à partir du promoteur CMV complet sans activation secondaire et non spécifique des gènes hôtes.

Le mécanisme T-REx™
Les éléments de contrôle transcriptionnel T-REx™ sont illustrés à la Figure 1. Deux séquences d’opérateurs de tétracycline (TetO₂) ont été insérées entre la boîte TATA du promoteur CMV et le site de départ transcriptionnel. La séquence TetO₂ elle-même n’a aucun effet sur l’expression. Lorsque la protéine répresseur de tétracycline (TR) est présente, elle lie efficacement les sites TetO₂ et bloque l’initiation de la transcription. La tétracycline ajoutée au milieu de culture se lie à la protéine TR et modifie la conformation de cette protéine. Cette modification entraîne la libération de la protéine TR aux sites TetO₂, déréprimant ainsi la transcription du promoteur CMV. Le résultat est une expression de haut niveau du gène d’intérêt (Figure 2). Les niveaux d’expression peuvent être modulés en fonction de la concentration de tétracycline et peuvent être induits à des niveaux atteints avec des vecteurs d’expression CMV constitutive.

T-REx™ est un puissant système d’expression de cellules de mammifères inductible qui vous permet de réguler l’expression à partir de l’activateur-promoteur de cytomégalovirus humain (CMV) complet. Les vecteurs d’expression inductibles T-REx™ offrent les caractéristiques suivantes :

• Séquence d’activateur-promoteur CMV complète contenant deux copies de la séquence TetO₂ de l’opérateur tétracycline pour une expression régulée de haut niveau
• Gène de résistance à l’hygromycine ou Zeocin™ pour une sélection efficace de lignées de cellules de mammifères stables
• Grand site de clonage multiple pour simplifier le clonage

En outre, le pcDNA™4 / TO / myc-His offre un épitope c-myc pour la détection rapide de la protéine recombinante avec un anticorps anti-myc et une séquence de polyhistidine (6xHis) pour la purification simple de protéines recombinantes avec de la résine de chélation du nickel et la détection avec un anticorps anti-His(C-term).

Le vecteur régulateur, le pcDNA™6 / TR, est fourni pour l’expression de haut niveau de la protéine répresseur de tétracycline (TR). Ce vecteur exprime le gène de résistance à la blasticidine pour une sélection rapide des lignées de cellules de mammifères qui expriment de façon stable la protéine TR.