Kit de synthèse d’ADNc premier brin Maxima H Minus
Kit de synthèse d’ADNc premier brin Maxima H Minus
Thermo Scientific™

Kit de synthèse d’ADNc premier brin Maxima H Minus

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K1652Kit only100 réactions
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Référence K1652
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Comprend:
Kit only
Nbre de réactions:
100 réactions
Grand volume ou format personnalisé
Prix (EUR)
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Le kit Thermo Scientific Maxima H Minus de synthèse d’ADNc premier brin est un système complet permettant la synthèse très efficace d’ADNc premier brin. Ce kit utilise la transcriptase inverse (RT) Maxima H Minus, qui est une enzyme avancée obtenue par évolution in vitro de la RT M-MuLV. L’enzyme présente la thermostabilité la plus importante parmi les dérivés de la RT M-MuLV et est dénuée de l’activité RNAse H. Le kit de synthèse d’ADNc premier brin Maxima H Minus permet la synthèse d’ADNc d’une longueur allant jusqu’à 20 kb à des températures élevées (jusqu’à 65°C), supplantant les capacités d’autres systèmes à produire de l’ADNc pleine longueur. En raison de l’augmentation des taux de synthèse, la réaction peut être effectuée en 30 minutes.

Points clés

• Augmentation des températures de réaction : l’ADNc premier brin peut être synthétisé dans la plage de températures de 42 à 65°C
• Rendements élevés de synthèse d’ADNc premier brin pleine longueur avec des modèles d’ARN jusqu’à 20 kb
• Amorçage flexible : oligo(dT)18, hexamère aléatoire ou amorces spécifiques aux gènes

Applications

• Synthèse d’ADNc premier brin pour la RT-PCR
• Construction de bibliothèques d’ADNc
• Génération de sondes d’hybridation
• Synthèse d’ARN antisens

Comprend

• Le kit de synthèse d’ADNc premier brin Maxima H Minus contient le mélange enzymatique Maxima H Minus, l’oligo(dT)18 et des amorces hexamères aléatoires, un tampon 5X RT, un mélange dNTP et de l’eau sans nucléase.

Informations supplémentaires sur les composants de la réaction

• Le mélange enzymatique Maxima H Minus Enzyme Mix contient la transcriptase inverse Maxima H Minus et l’inhibiteur d’ARNase RiboLock. L’inhibiteur d’ARNase RiboLock protège efficacement les modèles d’ARN de la dégradation par les RNAses A, B et C à des températures jusqu’à 55°C.
• Les amorces oligo(dT)18 et les amorces hexamères aléatoires sont fournies avec le kit. Les amorces hexamères aléatoires se lient de façon non spécifique et sont utilisées pour synthétiser l’ADNc à partir de tous les ARN d’une population d’ARN totaux. L’amorce oligo(dT)18 se fixe de manière sélective par hybridation à l’extrémité 3 de l’ARN poly(A), synthétisant l’ADNc uniquement à partir des ARNm à queue poly(A). Les amorces spécifiques aux gènes peuvent également être utilisées avec le kit pour amorcer la synthèse à partir d’une séquence donnée.
• Le mélange dNTP 10 mM est une solution aqueuse pré-mélangée de dATP, dTTP, dCTP et dGTP.
• De l’eau exempte de nucléase est fournie pour la préparation de la réaction et la dilution des échantillons d’ADN. L’absence d’endo-, d’exodésoxyribonucléases, de ribonucléases et de phosphatases a été confirmée par des tests de qualité appropriés.

Produits associés
Kit de synthèse d’ADNc premier brin Maxima H Minus, avec DNasedb
Kit de synthèse d’ADNc premier brin Maxima H Minus
Usage exclusivement réservé à la recherche. Ne pas utiliser pour des procédures de diagnostic.
Spécifications
Type de produit finalADNc premier brin
FormatKit
ComprendKit only
Nbre de réactions100 réactions
Température de réaction optimale50°C à 55°C
QuantitéEach
Format de réactionComposants séparés
Type de réactifTranscription inverse
Transcriptase inverseMaxima H Minus
Activité de la ribonucléase HRéduction
Conditions d’expéditionNeige carbonique
Taille (produit final)Jusqu’à 20 kb
Matériau de départARN
TechniqueTranscription inverse
À utiliser avec (application)PCR en temps réel (qPCR), PCR en temps réel
GC-Rich PCR PerformanceÉlevé
Vitesse de réaction30 min
Unit SizeEach
Contenu et stockage

• Mélange enzymatique H Minus Maxima
• Amorces Oligo(dT)18 et d’hexamères aléatoires
• Tampon RT 5X
• Mélange dNTP
• Eau exempte de nucléase

Conserver à –20°C.

Foire aux questions (FAQ)

When should I choose regular RevertAid RT or Maxima RT vs. RevertAid H-minus RT or Maxima H-minus RT?

It is generally beneficial to minimize RNase H activity when aiming to produce long transcripts for cDNA cloning. RNase H degrades RNA from RNA-DNA duplexes, which can result in truncated cDNA during reverse transcription of long mRNA. We also recommended using RNase H-minus RTs for template-independent addition of C nucleotides.

Do Thermo Scientific reverse transcriptases (RevertAid RT, RevertAid H-minus RT, Maxima RT, and Maxima H-minus RT) possess terminal deoxynucleotidyl (TdT) activity?

All Thermo Scientific reverse transcriptases possess intrinsic TdT activity although at varying degrees depending upon the reaction conditions. For addition of template-independent C nucleotides (as for SMART and RACE experiments), this specific TdT activity can be induced by Mn2+. We would recommend Maxima H- or RevertAid H- minus RTs for this purpose.

Is it preferable to use elevated temperature in the RT reaction when using Maxima reverse transcriptases?

cDNA synthesis at higher temperatures ensures successful transcription of RNA with high levels of secondary structure, reducing issues of primer access to template. Therefore, we do recommend to use RT enzymes with high thermostability, e.g. Maxima and Maxima H Minus Reverse Transcriptases, which provide higher yields of full-length cDNA, better sensitivity, and successful transcription of GC-rich templates.

What steps should I take while performing first strand cDNA synthesis using low purity template (e.g., inhibitors in RNA sample)?

Trace amounts of reagents used in RNA purification protocols may remain in solution and inhibit first-strand synthesis, e.g., SDS, EDTA, guanidine salts, phosphate, pyrophosphate, polyamines, spermidine. To remove trace contaminants, we recommend re-precipitating the RNA with ethanol and washing the pellet with 75% ethanol, or re-purifying the RNA.

For reverse transcription, how important is the quality of RNA template?

RNA purity and integrity are essential for synthesis and quantification of cDNA. Always assess the integrity of RNA prior to cDNA synthesis. Use freshly prepared RNA. Multiple freeze/thaw cycles of the RNA sample and synthesized cDNA is not recommended. Avoid RNase contamination and discard low quality RNA.

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