Les voies de signalisation Jak/Stat jouent un rôle essentiel dans les réponses cellulaires à des cytokines distinctes. L’une des voies Jak/Stat, Jak2/Stat5, permet de médier la prolifération cellulaire en réponse à l’interleukine-3 (IL-3), à la prolactine, à l’érythropoïétine (Epo) et au facteur stimulant de la colonie de granulocytes-macrophages (GM-CSF). L’extinction du gène JAK2 provoque une létalité embryonnaire due à une érythropoïèse défectueuse, suggérant que la voie Jak2/Stat5 joue un rôle important dans la formation d’érythrocytes. La découverte récente d’une mutation activatrice dans JAK2 (V617F) présente dans un pourcentage élevé de patients atteints de maladies myéloprolifératives (MPD) suggère que la voie Jak2/Stat5 est une cible thérapeutique potentielle pour certaines formes de MPD. Le facteur de transcription Stat5 activé se reconnaissent et se lient à une séquence spécifique d’ADN palindromique trouvée dans la région promotrice de β-caséine, au facteur 1 de régulation de l’interféron1 (irf-1) et à un certain nombre d’autres gènes. La lignée cellulaire CellSensor® irf1 - bla CTLL2 contient un gène rapporteur de la bêta-lactamase sous contrôle de l’élément de réponse irf -1, intégré de manière stable dans les cellules CTLL2. Les cellules CTLL2 sont un clone de cellules T cytotoxiques dérivées d’une souris C57BL/6 et leur croissance cellulaire dépend de l’interleukine de souris - 2 (MIL-2). Cette lignée cellulaire est validée pour EC50 et le facteur Z’ dans des conditions optimisées à l’aide de mIL-2. Cette lignée cellulaire a également été dosageée pour dans des conditions de dosage variables, notamment la concentration de DMSO, le nombre de cellules, le temps de stimulation, le temps de chargement du substrat. La sensibilité aux inhibiteurs de voie a également été dosageée. Les cellules CellSensor® irf1 - bla CTLL2 ont été stimulées par mIL-2 en trois exemplaires sur la plage de concentration indiquée dans un format à 384 puits. Les cellules ont été incubées pendant 5 heures avec un agoniste dans 0,5 % de DMSO, puis combinées avec le substrat LiveBLAzer™ - FRET B/G(CCF4 - AM) pendant 2,5 heures. Les valeurs d’émission de fluorescence à 460 nm et 530 nm ont été obtenues à l’aide d’un lecteur de plaques de fluorescence standard. Les rapports 460/530 pour chaque réplicat tracé par rapport aux concentrations indiquées de MIL -2. Les cellules CellSensor® irf1 - bla CTLL2 ont été traitées avec l’inhibiteur 1 Jak sur la plage de concentration indiquée dans un format à 384 puits pendant 30 minutes. Les cellules ont ensuite été incubées pendant 5 heures avec l’agoniste MIL-2 (1 ng/ml) dans 0,5 %, DMSO, puis combinées avec le substrat LiveBLAzer™ - FRET B/G (CCF4-AM) pendant 2 heures. Les valeurs d’émission de fluorescence à 460 nm et 530 nm ont été obtenues à l’aide d’un lecteur de plaques de fluorescence standard, converties en pourcentage d’inhibition par rapport à un ensemble de contrôles (cellules non stimulées et cellules stimulées EC80) puis tracées par rapport aux concentrations indiquées de l’inhibiteur 1 Jak. Les clients universitaires et sans but lucratif sont priés de se renseigner sur les tarifs spéciaux.