Le kit PureLink™ HiPure Midiprep de filtre plasmidique est conçu pour isoler l’ADN plasmidique de la plus haute pureté à partir de 25 à 100 ml d’une culture bactérienne d’une nuit. Les kits PureLink™ HiPure Maxiprep de filtres plasmidiques sont dotés de colonnes de filtrage HiPure, qui associent au sein d’une même unité un processus de filtration visant à clarifier le lysat bactérien et un processus de purification de l’ADN plasmidique par résine à échange d’anions. L’ADN plasmidique ainsi obtenu est de qualité équivalente à celui obtenu durant un processus de purification impliquant deux passages via des gradients de chlorure de césium, à savoir la méthode de purification d’ADN la plus rigoureuse. Purifiez l’ADN et obtenez en moins de deux heures un produit de haute qualité qui vous permettra de procéder à des transfections ou autres applications, sans avoir besoin de prendre de mesures supplémentaires pour l’élimination des contaminants (ARN, protéines, endotoxines, etc.). L’élimination du phénol, du chloroforme, du bromure d’éthidium et du chlorure de césium du protocole permet, par ailleurs, de limiter l’exposition aux matières dangereuses, et en facilite l’élimination. Les kits PureLink™ HiPure de filtre plasmidique offrent les avantages suivants :

• Protocoles simples : clarification du lysat bactérien sans centrifugation
• Résultats rapides : gain de temps grâce à une purification de l’ADN plasmidique en moins de deux heures
• Rendement élevé : jusqu’à 200 µg pour les kits Midiprep et 850 µg pour les kits Maxiprep (voir tableau)
• Performances fiables : L’ADN plasmidique purifié de haute qualité avec ces kits est compatible avec un grand nombre d’applications

Fonctionnement
L’ajout d’une colonne de filtration HiPure aux kits plasmidiques PureLink™ HiPure permet d’éliminer rapidement le lysat bactérien, sans avoir recours à une centrifugation (voir figure). La cartouche de filtration du lysat est intégrée à la colonne de liaison d’ADN afin de permettre à la fois la clarification du lysat et la liaison de l’ADN plasmidique directement à la résine à échange d’anions. Un seul nettoyage de la colonne permet d’éliminer les impuretés telles que l’ARN, les protéines, les métabolites et autre molécules à faible poids moléculaire. L’ADN plasmidique ultra-pur est alors élué avec un tampon à forte teneur en sel. L’ADN est alors dessalé, puis concentré selon un processus de précipitation à l’isopropanol, avant d’être collecté par centrifugation. Le protocole peut être effectué dans son intégralité en deux heures environ.