Kit de clonage par PCR Zero Blunt™, sans cellules compétentes

Le kit de clonage de PCR Zero Blunt™ permet de cloner facilement et efficacement (>80 %) les produits de PCR aux extrémités franches, qui ont été amplifiés par des ADN polymérases thermostables à activité correctrice. Le kit de clonage de PCR Zero Blunt™ s’appuie sur le vecteur de clonage multifonctions PCR™-Blunt et la ligase d’ADN ExpressLink™ T4 de façon à générer à température ambiante et en cinq minutes un produit de ligature.

Caractéristique du kit Zero Blunt™ Cloning™ avec vecteur PCR™-Blunt :
• Rapide et pratique—ligature en 5 minutes à température ambiante
• Efficacité—le gène ccdB comme sélecteur positif permet d’obtenir >80 % de clones avec le bon insert
• Flexible—résistance à la kanamycine ou à la Zeocin™, offrant ainsi le choix de l’antibiotique souhaité

Le vecteur pCR™-Blunt fournit :
• Sites EcoR I encadrant le site d’insertion du produit de PCR, pour une excision des inserts
• Site promoteur / amorce T7 pour la transcription et le séquençage de l’ARN in vitro
• Sites d’amorces sens et antisens M13 pour le séquençage ou la sélection PCR

Comment fonctionne le clonage par PCR Zero Blunt™
Le kit de clonage de PCR Zero Blunt™ a été conçu pour cloner des fragments de PCR aux extrémités franches (ou tout fragment d’ADN aux extrémités franches) avec un faible fond de non recombinants. Le vecteur PCR™-Blunt contient le gène létal E. coliccdB fusionné à l’extrémité carboxylique du fragment LacZα (Bernard et al., 1994). La ligature d’un fragment de PCR aux extrémités franches perturbe l’expression du gène de fusion lacZα-ccdB, permettant seulement la croissance des recombinants positifs après transformation. Les cellules contenant un vecteur non-recombinant sont tuées lorsque le mélange de transformation est plaqué.

Configurations du kit
Le kit de clonage de PCR Zero Blunt™ est disponible dans plusieurs configurations : avec les cellules chimiquement compétentes One Shot™ TOPO10 E. coli (K2700-20 et K2700-40) et sans les cellules chimiquement compétentes (K2750-20 et K2750-40) dans des configurations de kits à 20 ou 40 réactions.