Kit de clonage PCR Zero Blunt™ TOPO™, avec cellules E. coli TOP10 chimiquement compétentes One Shot™

Le kit de clonage par PCR Zero Blunt™ TOPO™ fournit une stratégie de clonage très efficace, en 5 minutes et en une étape (“clonage TOPO™”), pour l’insertion directe de produits de PCR à extrémités franches, amplifiés avec des polymérases thermostables à activité corrective, dans un vecteur de plasmide. Chaque kit contient le vecteur Zero Blunt™ TOPO™ (voir la figure) qui possède le gène ccdB comme sélecteur positif, autorisant seulement la croissance des vecteurs de plasmide recombinants. Les kits Zero™ Blunt™ TOPO™ sont disponibles dans une vaste gamme de cellules compétentes, ou sans cellules compétentes, selon vos besoins et votre budget. Caractéristiques des kits de clonage PCR Zero™ Blunt™ TOPO™ :

rapides et faciles : passez de la PCR aux clones en 3 étapes en un temps de manipulation inférieur à 5 minutes
Efficaces :obtenez jusqu’à 95 % de clones avec le bon insert
Éprouvés : performances fiables pendant plus d’une décennie avec plus de 4 000 citations
Simples :aucune ligase, procédure post-PCR ou amorces PCR contenant des séquences spécifiques n’est requise.

Présentation des kits de clonage Zero Blunt™ TOPO™

Vecteur : le vecteur PCR™Blunt II-TOPO™ : possède le gène ccdB qui permet la sélection directe des recombinants

Méthode de clonage : Le clonage : TOPO™ basé sur la topoisomérase I, ligature en 5 minutes des produits de PCR à extrémités franches et amplifiés avec des polymérases thermostables à activité corrective

Cellules compétentes : Plusieurs options : choisissez parmi les kits qui proposent des cellules compétentes générales, résistantes au bactériophage T1, à efficacité élevée ou à croissance rapide, ou utilisez les vôtres.

le vecteur PCR™Blunt II-TOPO™ conçu pour la correction de polymérases
Le vecteur PCR™Blunt II-TOPO™ est conçu pour cloner des produits PCR à extrémités franches générés par des polymérases thermostables à activité corrective telles que l’ADN polymérase Platinum™ Pfx. Le vecteur PCR™ Blunt II-TOPO™ contient les éléments suivants :

• Sites EcoRI encadrant le site d’insertion du produit de PCR, pour une excision simple des inserts
• Gènes de résistance à la kanamycine et au Zeocin™ permettant de choisir la méthode de sélection dans E. coli
• Site promoteur / amorce SP6 pour la transcription et le séquençage de l’ARN in vitro
• Sites d’amorce directe et inverse M13 pour le séquençage ou l’analyse PCR™

Sélection de clone PCR Blunt-II TOPO™
Le vecteur PCR™-Blunt II-TOPO™ permet de sélectionner directement les recombinants grâce à la rupture du gène E. coli, ccdB létal. Le vecteur contient le gène ccdB fusionné à l’extrémité carboxylique du fragment LacZα. La ligature d’un produit de PCR à extrémités franches perturbe l’expression du gène de fusion LacZα-ccdB, permettant seulement la croissance des recombinants positifs après transformation. Les cellules contenant des vecteurs non recombinants sont éliminées durant l’étalement. Par conséquent, un screening bleu ou blanc n’est pas requise.

Clonage simplifié basé sur TOPO™
Grâce à la technologie de clonage TOPO™, il n’est pas nécessaire d’utiliser des amorces pour PCR contenant des séquences spécifiques ou des procédures post-PCR, de préparer les vecteurs ni d’effectuer d’autres étapes de manipulation longues d’ADN. Il suffit d’ajouter votre réaction PCR directement dans le vecteur chargé en topoisomérase, d’incuber pendant 5 minutes et de transformer les cellules compétentes d’E. coli.

Clonage efficace
Avec jusqu’à 95 % de clones porteurs de l’insert désiré, il vous suffit d’analyser moins de clones, ce qui vous permet de gagner du temps et de l’argent. Le vecteur PCR™Blunt II-TOPO™ utilisé dans ce kit est doté du gène létal ccdB pour une sélection efficace de produits recombinants PCR à extrémités franches générés par des polymérases bythermostables à activité corrective.

La norme en matière de clonage
En matière de clonage, la technologie de clonage TOPO™ est un partenaire fiable pour des milliers de scientifiques depuis plus de dix ans. Rapide, simple d’utilisation et efficace, le clonage TOPO™ a été appliqué à de nombreux vecteurs différents pour un large éventail d’applications.

Options du kit PCR Cloning™ Zero Blunt™ TOPO™
Le kit de clonage par PCR Zero Blunt™ TOPO™, pour l’insertion directe des produits de PCR à extrémités franches dans un vecteur de plasmide, peut s’acheter avec une variété de cellules compétentes qui offrent différents avantages selon vos besoins

Clonage général : Cellules TOP10 (No de catalogue K2800-20, K2800-40)
Clonage haute efficacité : Cellules ™ TOP10 Electrocomp (No de catalogue K2860-01, K2860-40)
Clonage général, résistance au bactériophage T1 : DH5α-T1R (No de catalogue K2820-20, K2820-40)
Croissance rapide : Mach1™-T1R chimiquement compétente E. Coli (No de catalogue K2830-20)
Fournissez la vôtre : pour une souplesse et des économies (No de catalogue nº 450254)

Nous proposons également une version du kit qui inclut un kit de minipréparation d’ADN plasmidique rapide PureLink™ (réf. K2800-02) à utiliser pour l’isolement de plasmide recombinant purifié et prêt pour le séquençage.