Citations et références (13)

Invitrogen™

pBAD TOPO™ TA Expression Kit

Name: pBAD TOPO™ TA Expression Kit
SKU: K430001
Price: 1416.00 EUR

Le kit d’expression pBAD TOPO™ TA est spécialement conçu pour le clonage en une étape et l’expression procaryotique régulée desAfficher plus

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Référence	Marqueur de protéine	Quantité
K430001	Étiquette His (6x), étiquette d’épitope V5	20 réactions
K430040	Étiquette d‘épitote V5	40 réactions

2 options

Référence K430001

Prix (EUR)

1 416,00

Each

Marqueur de protéine:

Étiquette His (6x), étiquette d’épitope V5

Quantité:

20 réactions

Prix (EUR)

1 416,00

Each

Le kit d’expression pBAD TOPO™ TA est spécialement conçu pour le clonage en une étape et l’expression procaryotique régulée des produits PCR amplifiés par la Taq. Une fois votre produit PCR cloné grâce au kit TOPO™, vous pouvez passer directement à l’expression des protéines. Voici quelques-unes des caractéristiques pratiques du vecteur PBAD-TOPO™ :

• Vecteur linéarisé et activé par la topoisomérase I pour le clonage en 5 minutes des produits de PCR amplifiés par la Taq
• Promoteur araBAD pour une expression étroitement régulée au niveau de l’étiquette d’épitope V5 E. coli pour une détection avec anticorps anti-V5
• Étiquette polyhistidine à l’extrémité C-terminale (6xHis) pour une purification sur résine de chélation au nickel et une détection avec anticorps (extrémité C-terminale) anti-His
• Site de clivage de l’entérokinase pour retirer le peptide signal à l’extrémité N-terminale

Usage exclusivement réservé à la recherche. Ne pas utiliser pour des procédures de diagnostic.

Spécifications

Résistance aux antibiotiques des bactériesAmpicilline (AmpR)

Souche bactérienne ou de levuresLMG194, TOP10

ClivageSite de reconnaissance d’EK (entérokinase)

Système constitutif ou inductibleInductible

Mécanisme d’expressionExpression cellulaire

Système d’expressionE. coli

Agent d’inductionArabinose

Type de produitKit d’expression TA

Quantité20 réactions

Agent de sélection (eucaryotique)Néant

VecteurpBAD

Méthode de clonageTOPO™-TA

Gamme de produitsTOPO

AccélérateuraraBAD

Marqueur de protéineÉtiquette His (6x), étiquette d’épitope V5

Unit SizeEach

Contenu et stockage

Chaque kit d’expression pBAD TOPO™ TA contient deux boîtes et le stab d’E. coli LMG194. La boîte pBAD TOPO™ TA contient tous les réactifs nécessaires à la PCR (sauf la polymérase Taq), y compris les 200 ng de vecteur pBAD-TOPO™ activé par la topoisomérase I, l’eau stérile, les dNTP, le tampon PCR 10X, la solution saline, le gabarit de contrôle et les amorces, 20 % L-arabinose, les amorces pBAD pour le séquençage ou la sélection PCR ainsi qu’un plasmide de contrôle d’expression. Stockage à -20°C. La boîte One Shot™ contient tous les réactifs nécessaires à la transformation, y compris des aliquotes de 50 µl à usage unique d’E. coli chimiquement compétentes One Shot™ TOP10, un milieu S.O.C. et un plasmide de contrôle superenroulé. Conserver les cellules One Shot™ à -80°C. Conserver le stab d’E. coli LMG194 à 2 - 8°C. La stabilité de tous les réactifs est garantie pendant 6 mois, sous réserve d’une bonne conservation.

Foire aux questions (FAQ)

Can I store my competent E. coli in liquid nitrogen?

We do not recommend storing competent E. coli strains in liquid nitrogen as the extreme temperature can be harmful to the cells. Also, the plastic storage vials are not intended to withstand the extreme temperature and may crack or break.

How should I store my competent E. coli?

We recommend storing our competent E. coli strains at -80°C. Storage at warmer temperatures, even for a brief period of time, will significantly decrease transformation efficiency.

How much L-arabinose should I use to induce expression with the pBAD expression system?

While the amount of L-arabinose can vary depending on your expression experiment, we suggest performing a pilot expression experiment with varying amounts of L-arabinose from 0.00002% to 0.2%.

Should I use TOP10 cells or the LMG194 E. coli strain you offer for expression with my pBAD system?

Top10

Advantages:
- Saves time, can go directly from cloning to expression.
- The glycerol stock is more stable because these strains are endA- and recA-.

Disdvantages:
- This strain is not protease-deficient. Therefore, the protein may be degraded.

LMG194

Advantages:
- Grows well in minimal media, except M9.
-Have to transform the plasmid into the cells just for expression.
-RM medium with glucose to ensure low basal level of protein.

Disadvantages:
- Not protease-deficient. Therefore, the protein may be degraded.
- The glycerol stock may not be stable because this cell strain is not recA- or endA-.

What competent cells do you recommend I use for expression with my pBAD expression system?

We recommend using a competent cell strain that is araBADC- and araEFGH+, allowing transportation of L-arabinose, but not metabolizing it. This is important for expression studies, as the level of L-arabinose will be constant inside the cell and will not decrease over time. We offer our TOP10 competent cells, or our LMG194 E. coli strain.

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Citations et références (13)

Citations et références

Abstract

LuxS is required for persistent pneumococcal carriage and expression of virulence and biosynthesis genes.

Authors:Joyce EA, Kawale A, Censini S, Kim CC, Covacci A, Falkow S,

Journal:Infect Immun

PubMed ID:15102809

'Streptococcus pneumoniae causes several diseases, including otitis media, pneumonia, and meningitis. Although little is known about the regulation of or how individual pneumococcal factors contribute to these disease states, there is evidence suggesting that some factors are regulated by a cell-density-dependent mechanism (quorum sensing). Quorum sensing allows bacteria to couple ... More

Identification of a novel maturation mechanism and restricted substrate specificity for the SspB cysteine protease of Staphylococcus aureus.

Authors:Massimi I, Park E, Rice K, Muller-Esterl W, Sauder D, McGavin MJ,

Journal:J Biol Chem

PubMed ID:12207024

'The SspB cysteine protease of Staphylococcus aureus is expressed in an operon, flanked by the sspA serine protease, and sspC, encoding a 12.9-kDa protein of unknown function. SspB was expressed as a 40-kDa prepropeptide pSspB, which did not undergo autocatalytic maturation. Activity of pSspB was reduced compared with 22-kDa mature ... More

A dual-specificity aminoacyl-tRNA synthetase in the deep-rooted eukaryote giardia lamblia.

Authors:Bunjun S, Stathopoulos C, Graham D, Min B, Kitabatake M, Wang AL, Wang CC, Vivares CP, Weiss LM, Soll D

Journal:Proc Natl Acad Sci U S A

PubMed ID:11078517

'Cysteinyl-tRNA (Cys-tRNA) is essential for protein synthesis. In most organisms the enzyme responsible for the formation of Cys-tRNA is cysteinyl-tRNA synthetase (CysRS). The only known exceptions are the euryarchaea Methanococcus jannaschii and Methanobacterium thermoautotrophicum, which do not encode a CysRS. Deviating from the accepted concept of one aminoacyl-tRNA synthetase per ... More

RNA stem-loop enhanced expression of previously non-expressible genes.

Authors:Paulus M, Haslbeck M, Watzele M,

Journal:Nucleic Acids Res

PubMed ID:15163763

The key step in bacterial translation is formation of the pre-initiation complex. This requires initial contacts between mRNA, fMet-tRNA and the 30S subunit of the ribosome, steps that limit the initiation of translation. Here we report a method for improving translational initiation, which allows expression of several previously non-expressible genes. ... More

Shielding of the A1 Domain by the D'D3 Domains of von Willebrand Factor Modulates Its Interaction with Platelet Glycoprotein Ib-IX-V.

Authors:Ulrichts H, Udvardy M, Lenting PJ, Pareyn I, Vandeputte N, Vanhoorelbeke K, Deckmyn H,

Journal:J Biol Chem

PubMed ID:16373331

Soluble von Willebrand factor (VWF) has a low affinity for platelet glycoprotein (GP) Ibalpha and needs immobilization and/or high shear stress to enable binding of its A1 domain to the receptor. The previously described anti-VWF monoclonal antibody 1C1E7 enhances VWF/GPIbalpha binding and recognizes an epitope in the amino acids 764-1035 ... More

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