Solution de substrat de TMB

L’ajout d’une solution d’arrêt à l’acide sulfurique change la couleur en jaune, permettant une mesure précise de l’intensité à 450 nm en utilisant un spectrophotomètre ou un lecteur de plaque. Cette formulation particulière est utilisée dans la plupart des kits ELISA Thermo Scientific Pierce où elle offre des performances constantes pour la technique ELISA en sandwich.

Caractéristiques de la solution de substrat TMB :

• Numéro de produit : N301
• Taille : 100 ml (suffisant pour une dizaine de microplaques à 96 puits)
• Stockage : Expédié sur packs de froid. Stockez entre 2 et 8°C dès réception. Ne pas utiliser le produit au-delà de la date de péremption indiquée.
• Application : ELISA : Recommandé pour les immunodosages enzymatiques à base de péroxydase. Lors de l’oxydation, TMB forme un produit de réaction bleu hydrosoluble qui peut être mesuré par spectrophotométrie à 605 nm. Lors de l’acidification, le produit de réaction devient jaune avec un pic d’absorbance à 450 nm.
• Précautions : Ce produit est sensible à la contamination provenant d’une variété d’agents oxydants. Pour éviter toute contamination et expiration prématurée, évitez de mettre la solution TMB en contact avec toute source potentielle de contamination. Ne pipetez jamais directement à partir du flacon. Versez la quantité requise sur un tube et pipetez à partir du tube. Ne remettez pas l’excédent de TMB dans le récipient de stockage principal.

Procédure :
• Ajouter 100 µl de substrat de TMB à chaque puits contenant une réaction de péroxydase.
• Incuber à température ambiante pendant 15 à 30 minutes.
• Ajouter 100 µl de solution d’arrêt (0,16 M d’acide sulfurique, N600) à chaque puits.
• Mesurer l’absorbance à 450 nm.