L’AmpErase™ Uracil N-Glycosylase (UNG), qui fait partie du kit de prévention du transfert de contamination pour produits PCR GeneAmp™, est une enzyme recombinante ultra-pure de 26 kDa codée par le gène uracile N-glycosylase E. coli insérée dans un hôte E. coli en vue de diriger l’expression de la forme sauvage de l’enzyme. L’enzyme permet d’éliminer l’uracile présent au sein de l’ADN mono- ou bicaténaire.

Kit de prévention du transfert de contamination pour produits PCR GeneAmp™
Le kit de prévention du transfert de contamination pour produits PCR GeneAmp™ (disponible séparément) fournit des réactifs pour une méthode simple, mais puissante, permettant de s’assurer que les produits PCR ne peuvent pas être réamplifiés lors des amplifications par PCR ultérieures, empêchant ainsi les faux-positifs. Caractéristiques de ce kit :

• Blocage enzymatique du transfert de contamination de la PCR pour empêcher les faux-positifs
• Conçu pour dégrader les produits PCR des amplifications par PCR précédentes sans dégrader les modèles d’acides nucléiques natifs, ce qui améliore l’amplification
• Absence d’interférence avec toute application PCR ou PCR en temps réel
• Optimisation pour une utilisation avec les réactifs fondamentaux de PCR GeneAmp™ et les systèmes d’instruments GeneAmp™

Élimine le transfert de contamination de la PCR
Le kit utilise une réaction enzymatique analogue pour les systèmes restriction-modification et excision-réparation des cellules pour dégrader spécifiquement les produits PCR des amplifications par PCR antérieures auxquelles du dUTP a été incorporé, sans dégrader les modèles d’acides nucléiques natifs. La méthode utilisée pour rendre les produits PCR dégradables implique une substitution du dUTP par du dTTP au sein du mélange PCR, et le pré-traitement de tous les mélanges PCR ultérieurs avec de l’AmpErase™ Uracile N-glycosylase (UNG) avant toute amplification PCR. Les produits issus d’une amplification PCR contiennent de l’uracile ; ils peuvent ainsi être facilement distingués des modèles d’ADN natifs contenant de la thymidine. Les produits issus d’amplifications PCR antérieures sont éliminés par excision des résidus d’uracile avec de l’UNG, puis par dégradation thermique des polynucléotides abasiques obtenus. Bien que l’UNG soit actif sur l’ADN mono- et bicaténaire contenant du dUTP, les résidus de ribouracil au sein de l’ARN et du dUTP ne sont pas des substrats de l’UNG. L’ADN polymérase AmpliTaq™, l’ADN polymérase AmpliTaq Gold™, ainsi que les autres composants du mélange PCR restent intacts pendant le traitement à l’UNG, assurant ainsi une amplification PCR exempte de tout transfert de contamination par des produits PCR. Le produit PCR contenant du dUTP se comporte comme de l’ADN contenant du dT dans le cadre des applications de transfert, de clonage, de séquençage et dans la plupart des analyses post-PCR en général.