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ProQuest™ Two-Hybrid System with Gateway™ Technology

Le système double hybride ProQuest™ avec la technologie Gateway™ est un système de levures in vivo permettant d’identifier les interactionsAfficher plus

Référence	Quantité
PQ1000101	1 kit

Référence PQ1000101

Prix (EUR)

1 902,00

Quantité:

1 kit

Prix (EUR)

1 902,00

Le système double hybride ProQuest™ avec la technologie Gateway™ est un système de levures in vivo permettant d’identifier les interactions entre deux protéines. Cette interaction reconstitue un facteur de transcription fonctionnel qui active les gènes rapporteurs intégrés chromosomiquement où l’activation transcriptionnelle est contrôlée par la croissance des cellules sur des milieux sélectifs.
Caractéristiques du système ProQuest™ :
• La technologie Gateway™ pour permettre la génération rapide et facile de constructions d’appâts et de proies et faciliter l’application en aval
• Vecteurs DBD (domaine de liaison à l’ADN) et AD (domaine d’activation) à faible nombre de copies (ARS / CEN) pour contrôler la surexpression et augmenter la reproductibilité
• Trois gènes rapporteurs différents (HIS3, URA3 et lacZ) avec des régions promotrices indépendantes pour éliminer rapidement les faux positifs. Le gène rapporteur URA3 permet une sélection positive et négative, permettant ainsi des techniques doubles hybrides avancées telles que l’hybride double inversé.

• Ensemble d’interactions de contrôle basées sur Gateway™ fortes à faibles pour évaluer les résultats et la force de l’interaction testée

Usage exclusivement réservé à la recherche. Ne pas utiliser pour des procédures de diagnostic.

Spécifications

DoserDosage double hybride

Système d’expressionLevures

Type de produitSystème bi-hybride

Quantité1 kit

Gène rapporteurBeta-Gal (lacZ), HIS3, URA3

Gamme de produitsGateway, ProQuest

Unit SizeEach

Contenu et stockage

Le système double hybride ProQuest™ inclut les vecteurs d’expression de levure pDEST™32, pDEST™22 et pEXP-AD502 pour la génération de protéines de fusion de domaine de liaison à l’ADN GAL4 et de domaine d’activation GAL4 et un mélange enzymatique LR Clonase™ II, un stock de glycérol de la souche de levure MaV203, ainsi que des contrôles positifs et négatifs pour le dosage double hybride. Conserver les composants du kit à -80°C. Stabilité garantie pendant six mois lorsqu’il est correctement conservé.

Foire aux questions (FAQ)

How large of a PCR product can I recombine with a pDONR vector via BP cloning? Does the same apply for TOPO-adapted Entry vectors?

There is no theoretical limit to insert size for a BP reaction with a pDONR vector. Maximum size tested in-house is 12 kb. TOPO vectors are more sensitive to insert size and 3-5 kb is the upper limit for decent cloning efficiency.

How should I clean up my attB-PCR product?

After generating your attB-PCR product, we recommend purifying it to remove PCR buffer, unincorporated dNTPs, attB primers, and any attB primer-dimers. Primers and primer-dimers can recombine efficiently with the Donor vector in the BP reaction and may increase background after transformation into E. coli, whereas leftover PCR buffer may inhibit the BP reaction. Standard PCR product purification protocols using phenol/chloroform extraction followed by ammonium acetate and ethanol or isopropanol precipitation are not recommended for purification of the attB-PCR product as these protocols generally have exclusion limits of less than 100 bp and do not efficiently remove large primer-dimer products. We recommend a PEG purification protocol (see page 17 of the Gateway Technology with Clonase II manual). If you use the above protocol and your attB-PCR product is still not suitably purified, you may further gel-purify the product. We recommend using the PureLink Quick Gel Extraction kit.

I'm trying to propagate my Gateway destination vector and am not seeing any colonies. What should I do?

Check the genotype of the cell strain you are using. Our Gateway destination vectors typically contain a ccdB cassette, which, if uninterrupted, will inhibit E. coli growth. Therefore, un-cloned vectors should be propagated in a ccdB survival cell strain, such as our ccdB Survival 2 T1R competent cells.

Why does my prestained standard give different molecular weights for different types of gels?

Protein gels vary in pH. Each of the proteins in the standard has a dye molecule attached to it, and the charge on these dye molecules can change depending on the pH of the gel. This change in charge will affect the migration of the protein on the gel.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Protein Assays and Analysis Support Center.

Is the ProQuest Two-Hybrid System suitable for protein-protein interaction studies with membrane proteins?

The ProQuest Two-Hybrid System is not suitable for proteins containing membrane spanning domains. Protein interaction and activation of transcription of the reporter genes depends on the proteins localizing to the nucleus. You can remove membrane-spanning regions or include only cytosolic or extracelluar domains of membrane bound protein in the bait or prey constructs.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Protein Assays and Analysis Support Center.

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