Luc-Screen™ Extended-Glow Luciferase Reporter Gene Assay System
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Invitrogen™

Luc-Screen™ Extended-Glow Luciferase Reporter Gene Assay System

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Le système de dosage Luc-Screen™ à émission de lumière luminescente prolongée est conçu pour la détection sensible de l’enzyme rapporteur de luciférase de luciole dans les cultures cellulaires de microplaques. Un signal linéaire est obtenu avec le dosage Luc-Screen™ de 50 fg à 100 ng d’enzyme pure au sein d’un milieu de culture.

• Le format d’essai homogène permet la détection de la luciférase de luciole en présence de milieux de culture normaux sans élimination de milieux et sans étape de lyse cellulaire supplémentaire, offrant ainsi la procédure de dosage la plus simple et la plus rationalisée possible.
• La cinétique des dosages lumineux fournit une “fenêtre” pendant laquelle les mesures peuvent être effectuées, facilitant ainsi les applications HTS dans lesquelles l’automatisation des dosages est utilisée.
• Une large gamme dynamique de dosages de luciférase de luciole permet à l’utilisateur de mesurer le niveau d’enzyme avec précision du femtogramme à la gamme de nanogrammes.
• La sensibilité du dosage est de 100 à 1 000 fois meilleure qu’avec les dosages isotopiques ⁄ non isotopiques pour la chloramphénicol acétyl transférase (CAT) ou les dosages colorimétriques ⁄ par fluorescence pour la b-galactosidase, ce qui offre une plus grande sensibilité que les technologies de dosage concurrentes
• Un dosage hautement sensible avec une large gamme dynamique permet de détecter des niveaux élevés et bas de rapporteur sans réaliser de nombreuses dilutions d’échantillon.
• Le kit de dosage des gènes rapporteurs non radioactif élimine les radio-isotopes
• Le dosage peut être effectué en une heure environ, fournissant un délai d’exécution rapide du dosage.

Sensible
La luciférase est un rapporteur idéal en raison de la sensibilité élevée de la détection et de l’absence d’activité de la luciférase endogène dans les cellules de mammifères. Le dosage Luc-Screen associe™ commodément la lyse cellulaire dans les puits en présence d’un milieu de culture avec un dosage de haute sensibilité qui présente une cinétique d’émission de lumière à luminescence prolongée. Le signal lumineux peut être mesuré entre 10 minutes et plusieurs heures après l’ajout de réactifs de dosage, ce qui offre une grande flexibilité dans le temps entre l’ajout de réactifs et la mesure.

Haut débit
Le système Luc-Screen™ est conçu pour une flexibilité de dosage maximum dans un format à haut débit et peut être utilisé dans les luminomètres sans injecteurs automatiques. Le système Luc-Screen™ est formulé pour permettre un dosage de la luciférase pratique, facile à utiliser et optimisé pour une utilisation au sein d’un criblage à haut débit. La sensibilité élevée du dosage Luc-Screen™ est accompagée d’une large gamme dynamique.

Usage exclusivement réservé à la recherche. Ne pas utiliser pour des procédures de diagnostic.
Usage exclusivement réservé à la recherche. Ne pas utiliser pour des procédures de diagnostic.
Spécifications
DoserDosage de la luciférase
Cellules compatiblesCellules de mammifères
Méthode de détectionChimiluminescence
À utiliser avec (application)Dosages enzymatiques
À utiliser avec (équipement)Luminomètre (microplaque)
FormeLiquide
Compatibilité à haut débitCompatible avec le haut débit
Gamme de produitsLuc-Screen, NovaBright
Type de produitKit de dosage du gène rapporteur de luciférase
Quantité1000 dosages
AffichagePoint final
Type d’échantillonCultures cellulaires
SubstratLuciférine
Propriétés du substratsubstrat chimique
Type de substratSubstrat de luciférase
Enzyme cibleLuciférase
Unit Size1,000 assays
Contenu et stockage
Ce kit contient deux tampons de réaction.
Stockez le produit à -20°C.

Foire aux questions (FAQ)

Does serum concentration have an inhibitory effect on the luciferase assay?

For Fetal Bovine Serum (FBS), there is no difference between 10% and 5% FBS. It is worthwhile to note that the type of serum does affect the luciferase assay. We tested the effect of 6 different types of sera (FBS, heat-inactivated FBS, dialyzed FBS, charcoal-treated FBS, donor adult bovine serum, and donor equine serum) on secreted luciferases, e.g. Gaussia, Gaussia-Dura, and Cypridina Luciferases. No noticeable difference was observed among different types of sera except for donor adult bovine serum. Unknown factors in donor adult bovine serum caused up to 35% inhibition in secreted luciferase activity. Therefore, we don’t recommend using donor adult bovine serum for Gaussia, Gaussia-Dura, and Cypridina Luciferases.

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I used a white plate to read the luciferase assay and have very high background readings. Should I use a black plate?

The problems with white plates are related to cross-talk blocking, surface reflectivity and tendency to phosphorescence. We do not recommend using white plates because they give much higher background even if adapted to darkness for 10 minutes. The white plastic does not block the light completely, and some portion of the signal will go through the plastic and will be seen when you measure adjacent wells. The typical situation is if you change from black to white plates, where the background is about doubled and the signal is increased about 10 times. Black plates are recommend for best signal to noise ratio even though the RLU values will be lower. 

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What is the stability of the secreted luciferase?

Gaussia, Gaussia-Dura, and Cypridina Luciferase are stable in the culture media for greater than 24 hours. Generally, after transfection of CMV driven constructs, we see ever increasing secreted signal between 24 and 72 hours.

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How quickly is luciferase secreted?

The earliest detectable signal will depend on the strength of the promoter. In general, with a strong promoter (such as CMV), significant signal over background can be seen in as little as 20 minutes. However, with a weaker inducible promoter, significant signal over background may take 1-2 hours after induction.

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What instrument filters are required to read the luciferase assays?

We always recommend the luciferases to be read without filters for single luciferase assays. Use of filters reduces the amount of signal captured that may lead to decrease in sensitivity. Filters are required only for dual-spectral assays.

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