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Citations et références (20)
Invitrogen™
Vybrant™ FLICA Caspase Apoptosis Assay Kits for flow cytometry
Détectez l’apoptose grâce à la cytométrie en flux avec les dosages de caspases Vybrant FLICA qui détectent les activités des polycaspases et des caspases 3, 7 et 8.
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| Référence | Enzymes |
|---|---|
| V35118 | Caspase 3/7 |
| V35117 | Poly Caspases |
| V35119 | Caspase 8 |
Référence V35118
Prix (EUR)
522,00
25 assays
Enzymes:
Caspase 3/7
Prix (EUR)
522,00
25 assays
Détectez rapidement l’apoptose médiée par la caspase par cytométrie en flux avec les kits de dosage de caspase Vybrant FAM pour les polycaspases et les caspases 3 et 7. Les kits de dosage de caspase Vybrant FAM utilisent la méthodologie d’inhibiteur fluorescent de caspases (FLICA) pour détecter et signaler l’activité de la caspase. Plus précisément, ces kits de dosage de caspase contiennent des substrats élaborés FLICA FAM-VAD-FMK (pour les polycaspases), FAM-DEVD-FMK (pour les caspases 3 et 7) et FAM-LETD-FMK (pour les caspases 8). Ils comprennent également les colorations Hoechst 33342 et l’iodure de propidium, permettant l’évaluation simultanée de la perméabilité membranaire et du cycle cellulaire par cytométrie en flux.
Les kits de dosage de caspase Vybrant FAM pour la cytométrie en flux utilisent une nouvelle approche pour détecter les caspases actives : les kits tirent parti de la méthodologie FLICA, qui est un marqueur d’affinité. Ce marqueur d’affinité associe une fraction de cétone de fluorométhyl (FMK), qui peut réagir de façon covalente avec une cystéine, à une séquence d’amino-acide spécifique à la caspase. Différentes séquences de reconnaissance d’amino-acides sont utilisées pour détecter différentes caspases : valine-alanine-acide aspartique (VAD) pour les polycaspases (notamment caspase 1, 3, 4, 5, 6, 7, 8 et 9), acide aspartique-acide glutamique-valine-aspartique (DEVD) pour les caspases 3 et 7 et leucine-acide glutamique-thréonine-acide aspartique (LETD) pour la caspase 8. Un groupe de carboxyfluorescéines (FAM) fait office de rapporteur.
On pense que le réactif FLICA interagit avec le centre réactif enzymatique d’une caspase activée via la séquence de reconnaissance puis qu’il se fixe de manière covalente par la fraction FMK. L’inhibiteur FLICA est perméant aux cellules et non cytotoxique. Les molécules FLICA non liées se diffusent hors de la cellule et sont lavées ; le signal fluorescent restant constitue une mesure directe de la quantité de caspase active présente au moment de l’ajout de l’inhibiteur. Les pics approximatifs d’excitation et d’émission des réactifs FLICA, iodure de propidium et Hoechst 33342 sont respectivement de 488 nm⁄530 nm, 535 nm⁄6 617 nm et 350 nm⁄461 nm. Les réactifs de détection inclus dans les kits d’apoptose de dosage des polycaspases Vybrant FAM, de dosage des caspases 3 et 7 et de dosage des caspases 8 sont respectivement le réactif FAM-VAD-FMK 488⁄530, le réactif FAM-DEVD-FMK 488 ⁄530 et le réactif FAM-LETD-FMK 488⁄530.
On pense que le réactif FLICA interagit avec le centre réactif enzymatique d’une caspase activée via la séquence de reconnaissance puis qu’il se fixe de manière covalente par la fraction FMK. L’inhibiteur FLICA est perméant aux cellules et non cytotoxique. Les molécules FLICA non liées se diffusent hors de la cellule et sont lavées ; le signal fluorescent restant constitue une mesure directe de la quantité de caspase active présente au moment de l’ajout de l’inhibiteur. Les pics approximatifs d’excitation et d’émission des réactifs FLICA, iodure de propidium et Hoechst 33342 sont respectivement de 488 nm⁄530 nm, 535 nm⁄6 617 nm et 350 nm⁄461 nm. Les réactifs de détection inclus dans les kits d’apoptose de dosage des polycaspases Vybrant FAM, de dosage des caspases 3 et 7 et de dosage des caspases 8 sont respectivement le réactif FAM-VAD-FMK 488⁄530, le réactif FAM-DEVD-FMK 488 ⁄530 et le réactif FAM-LETD-FMK 488⁄530.
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.
Spécifications
EnzymesCaspase 3/7
Excitation / émissionFAM-DEVD-FMD : 388/530
IP : 535/617
Hoechst 33342 : 350/461
IP : 535/617
Hoechst 33342 : 350/461
Faisceaux laser du cytomètre en fluxUV, 488
À utiliser avec (équipement)Cytomètre en flux
Type d’étiquetteAutre(s) étiquette(s) ou colorant(s)
Marqueur ou colorantFAM, Hoechst 33342, iodure de propidium
Gamme de produitsVybrant
Type de produitKit de dosage de caspase
Quantité25 Assays
Conditions d’expéditionTempérature ambiante
Méthode de détectionFluorescence
FormatTube
Unit Size25 assays
Contenu et stockage
1 flacon de réactif FAM-DEVD-FMK caspase 3 et 7 (réactif FLICA, solide lyophilisé), 1 flacon de Hoechst 33342 (400 μl, 1 mM dans l’eau), 1 flacon d’IP (1 ml 250 μg/ml dans l’eau), 1 flacon de DMSO (0,5 ml), 1 flacon de solution fixatrice d’apoptose (10 % de formaldéhyde avec du méthanol dans le PBS, 6 ml), et 1 flacon de tampon de lavage d’apoptose 10x. Conserver au réfrigérateur (2 à 8°C) et à l’abri de la lumière.
Foire aux questions (FAQ)
What are the fluorescence excitation/emission maxima for the FAM-DEVD-FMK FLICA reagent, Hoechst 33342, and propidium iodide supplied in the Vybrant FAM Caspase-3 and -7 Assay Kit, for flow cytometry?
Citations et références (20)
Citations et références
Abstract
Monocyte Chemoattractant Protein-Induced Protein 1 (MCPIP1) Enhances Angiogenic and Cardiomyogenic Potential of Murine Bone Marrow-Derived Mesenchymal Stem Cells.
Journal:
PubMed ID:26214508
'The current evidence suggests that beneficial effects of mesenchymal stem cells (MSCs) toward myocardial repair are largely due to paracrine actions of several factors. Although Monocyte chemoattractant protein-induced protein 1 (MCPIP1) is involved in the regulation of inflammatory response, apoptosis and angiogenesis, whether MCPIP1 plays any role in stem cell-induced
Multiparametric evaluation of apoptosis: effects of standard cytotoxic agents and the cyanoguanidine CHS 828.
Journal:Mol Cancer Ther
PubMed ID:15141009
'A multiparametric high-content screening assay for measurement of apoptosis was developed. HeLa cells and lymphoma U-937 cells were exposed to cytotoxic drugs in flat-bottomed optical microtiter plates. After incubation, the DNA-binding dye Hoechst 33342, fluorescein-tagged probes that covalently bind active caspases and chloromethyl-X-rosamine to detect mitochondrial membrane potential (MMP) were
Flow cytometry-based apoptosis detection.
Journal:Methods Mol Biol
PubMed ID:19609746
'An apoptosing cell demonstrates multitude of characteristic morphological and biochemical features, which vary depending on the stimuli and the cell type. The gross majority of classical apoptotic hallmarks can be rapidly examined by flow and image cytometry. Cytometry thus became a technology of choice in diverse studies of cellular demise.
BH3-only protein Noxa regulates apoptosis in activated B cells and controls high-affinity antibody formation.
Journal:Blood
PubMed ID:22144184
The efficiency of humoral immune responses depends on the selective outgrowth of B cells and plasma cells that produce high affinity antibodies. The factors responsible for affinity maturation of B cell clones in the germinal center (GC) have been well established but selection mechanisms that allow clones to enter the
In vitro primary human lymphocyte flow cytometry based micronucleus assay: simultaneous assessment of cell proliferation, apoptosis and MN frequency.
Journal:Mutagenesis
PubMed ID:21791709
In order to minimise the number of positive in vitro cytogenetic results which are not confirmed in rodent carcinogenicity tests, biological systems that are p53 and DNA repair proficient should be recommended. Moreover, an appropriate cytotoxicity parameter for top dose selection should be considered. Recent International Conference on Harmonisation draft