Glutatión-agarosa Pierce™

La glutatión-agarosa Thermo Scientific Pierce es una resina de alta capacidad y alto rendimiento para la purificación por afinidad de proteínas de fusión procedentes de lisados celulares marcadas con GST.

Características de glutatión-agarosa:

• Pulpa: agarosa granulada al 6 % entrecruzada, hecha pulpa en agua con azida sódica
• Gran capacidad: une al menos 40 mg de proteína GST recombinante purificada por milímetro de resina
• Gran producción y pureza: purifica de forma consistente al menos 10 mg de proteínas con etiquetas GST por mililitro de resina con una pureza superior al 90 %
• Rentable: la resina tiene un precio económico y se puede volver a usar al menos cinco veces sin reducción de la capacidad de unión y del rendimiento de purificación
• Versátil: funciona bien para la purificación de proteínas de fusión de GST de lisados bacterianos o para su uso con proteínas marcadas con GST prepurificadas para el «pull-down» de interacciones de proteínas
• Compatible: validado y efectivo para su uso con los reactivos de lisis celular Thermo Scientific para la extracción y purificación de cultivos celulares de mamíferos o bacterianos

El soporte de alta calidad consiste en glutatión inmovilizado por su grupo sulfhidrilo central a través del brazo espaciador de 12 átomos a la agarosa granulada al 6 % entrecruzada. La purificación de las proteínas de fusión con GST utilizando perlas de agarosa con glutatión (GSH) está bien documentada y es adaptable a diversas escalas, formatos de columna y aplicaciones específicas. Tanto si el propósito es purificar grandes cantidades de proteína recombinante procedente de lisados de E. coli sobreexpresados o investigar interacciones de proteínas en las que participen proteínas de cebo etiquetadas con GST, el glutatión-agarosa Pierce es adecuado para la tarea.

El glutatión-agarosa Pierce purifica eficazmente altos niveles de proteínas de fusión etiquetadas con GST sobreexpresadas procedentes de lisados bacterianos, tales como las obtenidas con los reactivos de extracción de proteínas bacterianas Thermo Scientific B-PER.

El glutatión-agarosa Pierce realiza procedimientos de unión, ya sea en lotes o en columnas de centrifugado, y en amplia variedad de escalas. El rendimiento es igual o superior a las resinas GSH populares de otros proveedores.

La glutatión-agarosa Pierce es un soporte de afinidad de alta calidad, estable y distensible. Las pruebas confirman la ausencia de reducciones en el rendimiento después de cinco ciclos de uso repetidos. Estos datos indican que la resina es altamente resistente a la degradación estructural y a la lixiviación de ligandos durante el uso normal.

La expresión y purificación de proteínas recombinantes es un factor central para estudiar la regulación, estructura y funciones de las proteínas. La mayoría de las proteínas recombinantes se expresan como fusiones con proteínas pequeñas o etiquetas de afinidad cortas, tales como la glutatión S-transferasa (GST). Esta proteína se une específicamente a glutatión reducido (GSH) en condiciones casi neutras no desnaturalizadoras (p. ej., tampón de Tris). La proteína unida se disocia (eluye) fácilmente mediante desplazamiento competitivo con tampón que contiene GSH reducido libre (glutatión oxidado, el GSSH no es eficaz para este propósito). Cuando las proteínas de interés se expresan como fusiones con GST y el glutatión es inmovilizado en un soporte sólido, este sistema proteína-sustrato permite la purificación por afinidad de proteínas recombinantes, así como otra serie de experimentos con esas proteínas.

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