Pierce™ Monomeric Avidin Agarose Kit, 2 mL

El kit de avidina monomérica Thermo Scientific Pierce permite una purificación por afinidad suave y sin desnaturalización de las moléculas biotiniladas.

Características del kit de avidina monomérica:

• Kit práctico: kit de purificación completo con columna preenvasada y tampones.
•No desnaturalizante: purifica los productos biotinilados utilizando condiciones de elución suaves (2 mM de biotina libre).
• Reutilizable: la agarosa avidina monomérica reutilizable puede regenerarse y reutilizarse al menos 10 veces, con una pérdida marginal en la capacidad de unión de biotina (disminución de aproximadamente el 2,5 % por regeneración).
• Específica: conserva la especificidad de la unión de biotina y la baja unión no específica de la avidina nativa.
• Flexible: permite enlazar muestras de forma flexible en una variedad de tampones fisiológicos y eluirlas con 0,1 M de glicina o por competición con 2 mM de biotina.
• Buena capacidad de unión: superior a 1,2 mg de BSA biotinilada por ml de resina.

La proteína de avidina monomérica inmovilizada se une a la biotina con una alta especificidad y una afinidad moderada, lo que permite lavar las moléculas que no son de biotina y eluir las moléculas unidas etiquetadas con biotina de forma competitiva con 2 mM de biotina en una solución salina tamponada con fosfato (PBS). La técnica facilita las condiciones de elución más suaves para la purificación de proteínas biotiniladas y evita tanto la contaminación como los demás problemas asociados con los métodos de avidina y estreptavidina tradicionales. La columna de avidina monomérica puede regenerarse utilizando 0,1 M de glicina para eliminar la columna de con enlace de biotina residual sin perder la capacidad de unirse a otra muestra biotinilada.

Con avidina o estreptavidina típica, la afinidad de unión de la biotina (Kd = 10^-15M) es tan grande que la purificación con estos medios tradicionales requiere de condiciones desnaturalizantes para la elución, como 8 M de guanidina·HCl con pH 1,5 o la ebullición en tampón de carga de muestra reductor para SDS-PAGE. Además de sus efectos adversos sobre la proteína biotinilada de interés, estas duras condiciones de elución suelen causar proteínas extrañas (es decir, subunidades de avidina o estreptavidina) que se eliminan de la resina y se eluyen conjuntamente con el producto de purificación deseado. Por el contrario, cuando la avidina se acopla a una resina (por ejemplo, agarosa granulada entrecruzada o resina UltraLink) como monómero de la subunidad, mantiene su especificidad para la biotina aunque su afinidad de unión con biotina disminuye a un nivel (Kd = 10^-8M) que genera la elución subsiguiente.

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