EZ-Link™ Micro Sulfo-NHS-SS-Biotinylation Kit

El kit de biotinilación Sulfo NHS-SS Thermo Scientific EZ-Link contiene suficientes reactivos para ocho reacciones de biotinilación (por ejemplo, 0,05–0,2 mg de anticuerpos por reacción). La sulfo-NHS-SS-biotina EZ-Link incluida en el kit es un reactivo de biotinilización soluble en agua de éster de N-hidroxisucinimida (NHS) cuyo brazo espaciador incluye un enlace disulfuro escindible para el etiquetado reversible de proteínas y aminas primarias de la superficie celular.

Características de la Sulfo-NHS-SS-biotina EZ-Link:

• Etiquetado de proteínas: biotinile anticuerpos para facilitar la inmovilización, purificación o detección.
• Etiquetado de la superficie celular: biotinile solo las proteínas de superficie de células completas, ya que el reactivo cargado negativamente no penetra en las membranas celulares.
• Aminorreactivo: reacciona con aminas primarias (-NH2), como las cadenas laterales de lisina o el extremo amino de los polipéptidos.
• Escindible: el enlace de disulfuro del brazo espaciador permite eliminar la etiqueta de biotina mediante el uso de agentes reductores como DTT; solo un pequeño grupo sulfhidrilo permanece unido a la molécula.
• Soluble: el grupo cargado con sulfo-NHS aumenta la solubilidad en agua del reactivo en comparación con los compuestos normales de éster de NHS.
• Longitud media: la longitud del brazo espaciador es de 24,3 angstroms (longitud total añadida al elemente diana); está compuesto por el grupo de ácido valérico de la biotina nativa extendido por una cadena de 7 átomos.

La sulfo-NHS-SS-biotina es un reactivo de biotinilación aminorreactivo que contiene un brazo espaciador extendido para reducir el impedimento estérico asociado a la unión de la avidina. Este reactivo es soluble en agua, por lo que permite que la biotinilización se realice en ausencia de disolventes orgánicos como el dimetilsulfóxido (DMSO) o la dimetilformamida (DMF) para aplicaciones que no toleran disolventes o que se complican debido a su inclusión. El compuesto es particularmente útil para etiquetar y purificar proteínas de la superficie celular, ya que (a) su grupo sulfonato impide que atraviese las membranas celulares y (b) su brazo espaciador divisible permite que las proteínas inicialmente biotiniladas se liberen de las columnas de afinidad con la estreptavidina.

Fabricamos reactivos de biotina para garantizar la máxima integridad, coherencia y rendimiento global posible del producto en las aplicaciones de investigación previstas.

Los ésteres de N-hidroxisulfosuccinimida (NHS) de biotina son el tipo de reactivo de biotinilación que más se utiliza. Las biotinas activadas por NHS reaccionan eficazmente con grupos amino primarios (-NH2) en tampones alcalinos para formar enlaces amida estables. Las proteínas (como los anticuerpos) suelen tener varias aminas primarias que están disponibles como objetivos de etiquetado, incluyendo la cadena lateral de residuos de lisina (K) y el extremo N de cada polipéptido.

Las variedades de reactivos de éster de NHS de biotina difieren en longitud, solubilidad, permeabilidad celular y capacidad de escisión. Las biotinas de NHS no sulfonadas permean las células, pero deben disolverse en disolvente orgánico, como DMSO o DMF. Las biotinas de sulfo-NHS (y aquellas con separadores pegilados) son solubles en agua directamente, pero no permean las membranas. Las variedades que contienen enlaces disulfuro se pueden escindir mediante agentes reductores, lo que permite desconectar el grupo de biotina de la proteína etiquetada.

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