EZ-Link™ Sulfo-NHS-SS-Biotin, No Weigh Format

Thermo Scientific EZ-Link Sulfo-NHS-SS-Biotin ist ein wasserlösliches NHS-Ester-Biotinylierungsreagenz, dessen Spacerarm eine spaltbare Disulfid-Bindung für die reversible Markierung von Proteinen und primären Aminen an Zelloberflächen enthält.

Merkmale von EZ-Link Sulfo-NHS-SS-Biotin:

• Proteinmarkierung – Biotinylieren von Antikörpern zur Erleichterung der Immobilisierung, Reinigung oder Detektion
• Zelloberflächenmarkierung – Biotinyliert nur Oberflächenproteine ganzer Zellen, da das negativ geladene Reagenz die Zellmembranen nicht durchdringt
• Aminreaktiv – Reagiert mit primären Aminen (-NH2), wie z. B. Lysin-Seitenketten, oder den Amino-Termini von Polypeptiden
• Spaltbar – Disulfid-Bindung im Spacerarm ermöglicht die Entfernung der Biotinmarkierung mit Reduktionsmitteln wie DTT; nur eine kleine Sulfhydrylgruppe verbleibt am Molekül
• Löslich – Die geladene Sulfo-NHS-Gruppe erhöht die Wasserlöslichkeit des Reagenzes im Vergleich zu normalen NHS-Ester-Verbindungen
• Mittlere Länge – Der Spacerarm (die dem Ziel hinzugefügte Gesamtlänge) beträgt 24,3 Angström; er besteht aus der nativen, um eine 7-Atom-Kette erweiterten Biotin-Valeriansäuregruppe

Sulfo-NHS-SS-Biotin ist ein Thiol-spaltbares aminreaktives Biotinylierungsreagenz, das einen verlängerten Spacerarm enthält, um die sterische Hinderung im Zusammenhang mit der Avidin-Bindung zu verringern. Dieses Reagenz ist wasserlöslich, sodass die Biotinylierung ohne organische Lösungsmittel wie DMSO oder DMF für Anwendungen, die Lösungsmittel nicht tolerieren oder durch Lösungsmittel zu komplex werden, durchgeführt werden kann. Die Verbindung ist besonders nützlich für die Markierung und Aufreinigung von Zelloberflächenproteinen, da (a) ihre Sulfonatgruppe verhindert, dass sie Zellmembranen durchdringt, und (b) ihr spaltbarer Spacerarm ermöglicht, zunächst biotinylierte Proteine aus Streptavidin-Affinitätssäulen zu lösen.

Wir stellen Biotin-Reagenzien her, um die höchstmögliche Gesamtproduktintegrität, -konsistenz und -leistung für die vorgesehenen Forschungsanwendungen zu gewährleisten.

N-Hydroxysulfosuccinimid-(NHS)-Ester von Biotin sind die beliebteste Art von Biotinylierungsreagenz. NHS-aktivierte Biotine reagieren effizient mit primären Aminogruppen (-NH2) in alkalischen Puffern und bilden stabile Amidbindungen. Proteine (z. B. Antikörper) haben in der Regel mehrere primäre Amine, die als Ziele für die Markierung zur Verfügung stehen, einschließlich der Seitenkette von Lysin-(K)-Resten und des N-Terminus jedes Polypeptids.

Verschiedene Biotin-NHS-Ester-Reagenzien unterscheiden sich in Länge, Löslichkeit, Zelldurchlässigkeit und Spaltbarkeit. Nicht sulfonierte NHS-Biotine sind zellgängig, müssen jedoch in einem organischen Lösungsmittel wie DMSO oder DMF gelöst werden. Sulfo-NHS-Biotine (und solche mit pegylierten Spacern) sind direkt wasserlöslich, können jedoch nicht die Zellmembran durchdringen. Sorten, die Disulfid-Bindungen enthalten, können mit Reduktionsmitteln gespalten werden, wodurch die Biotin-Gruppe vom markierten Protein getrennt wird.

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