L-foto-leucina Thermo Scientific Pierce es un análogo de la L-leucina que se puede incorporar a las proteínas durante la síntesis y, después, se activa con luz para entrecruzar covalentemente las proteínas que interactúan en las células.

Características de L-foto-leucina:

• Etiquetado in vivo: incropora un grupo fotorreactivo en proteínas utilizando la maquinaria celular normal de células vivas
• Entrecruzamiento in vivo: encuentra proteínas que interactúan en el entorno celular nativo
• Mayor especificidad: entrecruza correctamente proteínas que interactúan y están posicionadas en sus interfaces dentro de los dominios de interacción de proteínas
• Recuperación eficiente: recuperación del 90 % de las proteínas en lisados celulares tras el entrecruzamiento
• Compatible: entrecruza proteínas expresadas en una amplia variedad de líneas celulares, incluyendo HeLa, 293T, COS7, U2OS, A549, A431, HepG2, NIH 3T3 y C6
• Facilidad de uso: los reactivos son fotoestables bajo la iluminación normal de laboratorio, eliminando la necesidad de trabajar en la oscuridad

L-foto-leucina Thermo Scientific es un análogo de la L-leucina que se puede incorporar endógenamente en la secuencia primaria de proteínas durante la síntesis y, después, luz ultravioleta (UV) activada para entrecruzar covalentemente proteínas dentro de los dominios de interacción proteína a proteína en su entorno nativo dentro de las células vivas. Este potente método permite estudiar y caracterizar interacciones de proteínas estables y transitorias en células sin el uso de entrecruzadores químicos completamente extraños y disolventes de reactivos asociados durante el experimento de interacción, que pueden afectar adversamente a la biología celular que se estudia.

Cuando se combina su uso con medios limitantes especialmente formulados sin leucina, la maquinaria de síntesis de proteínas dentro de la célula trata al derivado fotoactivable como un aminoácido natural. Como resultado, se puede sustituir por la leucina en la secuencia primaria de proteínas durante el catabolismo y el crecimiento. Los derivados de la foto-leucina contienen anillos de diazirina que se activan cuando se exponen a la luz UV para convertirse en intermediarios reactivos que forman enlaces covalentes con las cadenas laterales de proteínas cercanas y cadenas principales. La asociación natural de los socios de unión dentro de la célula puede ser atrapada instantáneamente por la fotoactivación de las proteínas que contienen diazirina en las células cultivadas. Los complejos de proteínas entrecruzados pueden detectarse mediante una disminución de la movilidad en SDS-PAGE, además de detección de Western blot, cromatografía de exclusión por tamaños, gradiente de densidad de sacarosa o espectrometría de masas.

Recursos:

Preguntas frecuentes sobre el aminoácido fotorreactivo

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