L-Photo-Methionine

Thermo Scientific Pierce L-Photo-Methionin ist ein Analogon von L-Methionin, das während der Synthese in Proteine integriert und dann durch Licht aktiviert werden kann, um interagierende Proteine in Zellen kovalent zu vernetzen.

Merkmale von L-Photo-Methionin:

• In-vivo-Markierung — Einbinden lichtreaktiver Gruppen in Proteine mit Hilfe normaler zellulärer Maschinen lebender Zellen
• In-vivo -Vernetzung — Finden von interagierenden Proteinen in der nativen zellulären Umgebung
• Erhöhte Spezifität —Korrekte Vernetzung interagierender Proteine an ihren Schnittstellen innerhalb von Proteininteraktionsdomänen
• Effiziente Rückgewinnung — 90 % Proteinrückgewinnung in Zelllysaten nach der Vernetzung
• Kompatibel —Vernetzung von Proteinen, die in einer Vielzahl von Zelllinien exprimiert werden, einschließlich HeLa, 293T, COS7, U2OS, A549, A431, HepG2, NIH 3T3 und C6
• Leicht zu verwenden — zu ermittelnde Reagenzien sind bei normaler Laborbeleuchtung lichtbeständig, Die Notwendigkeit, im Dunkeln zu arbeiten, entfällt

Thermo Scientific L-Photo-Methionin ist ein Analogon von L-Methionin, das während der Synthese endogen in die Primärsequenz von Proteinen integriert werden kann und dann mit ultraviolettem Licht (UV) aktiviert wird, um Proteine in Protein-Protein-Interaktionsdomänen in ihrer nativen Umgebung in lebenden Zellen kovalent zu vernetzen. Die leistungsstarke Methode ermöglicht die Untersuchung und Charakterisierung stabiler und transienter Proteininteraktionen in Zellen ohne die Verwendung vollständig fremder chemischer Crosslinker und zugehöriger Reagenzienlösungsmittel während des Interaktionsexperiments, was die zu untersuchende Zellbiologie beeinträchtigen kann.

Bei Verwendung in Kombination mit speziell formulierten limitierenden Medien, die frei von Methionin sind, wird das photoaktivierbare Derivat wie eine natürlich vorkommende Aminosäure von der Proteinsynthesemaschinerie innerhalb der Zelle behandelt. Dadurch kann Methionin während des Katabolismus und Wachstums in der Primärsequenz von Proteinen substituiert werden. Photo-Methionin-Derivate enthalten Diazirinringe, die bei UV-Licht aktiviert werden, um reaktive Zwischenprodukte zu werden, die kovalente Bindungen zu nahe gelegenen eiweißseitigen Ketten und Backbones bilden. Durch die Photoaktivierung der diazirinhaltigen Proteine in den kultivierten Zellen können natürlich bindende Partner innerhalb der Zelle sofort eingeschlossen werden. Vernetzte Proteinkomplexe können durch verringerte Mobilität auf SDS-PAGE, gefolgt von westlicher Blot-Erkennung, Größenausschlusschromatographie, Saccharosedichte-Gradientensedimentation oder Massenspektrometrie nachgewiesen werden.

Ressourcen:

Photoreaktive Aminosäuren FAQ

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