Pierce™ Fluorescent Protease Assay Kit

El kit de ensayo fluorescente de proteasas Thermo Scientific Pierce mide la actividad de las proteasas totales en muestras, lo que permite evaluar el progreso de procedimientos de aislamiento de proteasas o cuantificar la contaminación por proteasas en muestras biológicas.

Este kit incluye caseína marcada con fluoresceína como sustrato para determinar la actividad de las proteasas en una muestra, bien mediante transferencia de energía de resonancia de la fluorescencia (FRET) con un fluorímetro estándar, o bien mediante polarización de la fluorescencia (FP) con un equipo adecuado. La FTC-caseína es una caseína natural que se ha marcado utilizando un gran exceso molar de isotiocianato de fluoresceína (FITC). Las propiedades de fluorescencia de este sustrato de proteínas intactas muy marcadas cambian considerablemente tras la digestión por proteasas, lo que permite medir el grado de proteólisis.

Características del kit de ensayo fluorescente de proteasas

• Sustrato de caseína: mide la actividad de cualquier proteasa que escinda la caseína en fragmentos peptídicos
• Patrón de tripsina: cuantifica la actividad proteasa en relación con la tripsina, una referencia universalmente aceptada
• Sensible: 1000 veces más sensible que los ensayos que utilizan formas no modificadas de caseína
• Sencillo y rápido: los protocolos para tubos de ensayos y para microplacas se realizan en menos de una hora
• Homogéneo: con pasos de adición solamente; no requiere pasos de separación, transferencia o parada
• Personalizable: permite adaptar fácilmente el tiempo, la temperatura y el pH para optimizar la sensibilidad a las proteasas de interés

Aplicaciones:
• Evaluar la integridad funcional y el progreso global de la purificación de proteasas
• Cuantificar la contaminación por proteasas en muestras de proteínas
• Caracterizar la actividad de proteasas poco comunes mediante comparación con tripsina
• Evaluar las condiciones de los tampones en relación con sus efectos sobre la función y la actividad de las proteasas

Especificaciones adicionales:
• Sustrato: caseína etiquetada con fluoresceína (FITC-caseína); disponible por separado con la referencia 23267
• Base del ensayo: cambio en la resonancia de la fluorescencia (FRET) o la polarización de la fluorescencia (FP)
• Medición: instrumento con filtros de excitación y emisión de fluoresceína (485/538 nm)

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