Pierce™ Agarose ChIP Kit
Pierce™ Agarose ChIP Kit
Thermo Scientific™

Pierce™ Agarose ChIP Kit

El kit de ChIP en agarosa Thermo Scientific Pierce ofrece un completo conjunto de reactivos y un protocolo sencillo, rápidoMás información
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Número de catálogoCantidad
26156Kit para 30 reacciones
Número de catálogo 26156
Precio (MXN)
-
Cantidad:
Kit para 30 reacciones
Pedido a granel o personalizado
El kit de ChIP en agarosa Thermo Scientific Pierce ofrece un completo conjunto de reactivos y un protocolo sencillo, rápido y reproducible para realizar ensayos de inmunoprecipitación de cromatina (ChIP).

Características del kit de ChIP en agarosa:

• Protocolo de ensayo de CHiP simple y rápido (< 8 horas)
• Alta eficiencia en el aislamiento y la lisis de núcleos
• Digestión enzimática fácil y reproducible
• Bajo fondo y alta capacidad de unión proteína A/G resina de agarosa
• Controles positivos altamente específicos incluidos: Anticuerpo de ARN polimerasa II y primers de PCR para GAPDH
• Formato de columna de centrifugación rápido y reproducible
• Purificación de ADN de alta recuperación
• Anticuerpos disponibles validados por ChIP

El kit de ChIP en agarosa Pierce contiene suficientes reactivos para realizar 30 ensayos de ChIP con controles adecuados, mediante un protocolo optimizado y un práctico formato de columna de centrifugación. También se dispone de anticuerpos validados por ChIP y de calidad garantizada para su uso con el kit de ChIP en agarosa Pierce. Debido a que los anticuerpos que trabajan para el Western blot pueden no funcionar en ensayos de ChIP, hemos reunido nuestros anticuerpos monoclonales y policlonales validados por ChIP más populares aquí para ayudarle a pasar de la configuración experimental a los resultados más rápidamente.

La fuerza del ensayo de ChIP es su capacidad de capturar una instantánea de las interacciones específicas de proteína-ADN a medida que se producen en las células vivas, y luego cuantificar las interacciones mediante PCR estándar o cuantitativa. Los ensayos de ChIP satisfactorios requieren la realización de una serie de pasos clave (entrecruzado, preparación de la cromatina e inmunoprecipitación) antes de detectar la secuencia de ADN genómico diana. A nivel individual, la optimización de cada paso del protocolo de ensayo de ChIP puede ser laboriosa. El kit de ensayo de ChIP en agarosa Pierce simplifica el proceso, facilitando la obtención de resultados exactos y reproducibles.

Para realizar ensayos de ChIP con el kit de ChIP en agarosa Pierce, se estabilizan complejos proteína-ADN, y luego se extraen. El entrecruzamiento in vivo se logra tradicionalmente con formaldehído. El entrecruzamiento realizado directamente en las células encierra los complejos proteína-ADN, atrapando estas interacciones inestables y a veces transitorias. Para lisar, extraer y solubilizar los complejos entrecruzados, el kit de ensayo de ChIP incluye el módulo de preparación de cromatina Thermo Scientific (también se vende por separado con la referencia 26158). En conjunto, este completo kit de ensayo de ChIP proporciona un medio sencillo, fiable y cómodo para aislar ADN ligado a la cromatina y enriquecer muestras para las proteínas de interés con menos del 15 % de contaminación de otros compartimentos celulares, sin un homogeneizador Dounce.

Productos relacionados
Módulo de preparación de cromatina Pierce™
Proteína A/G Plus agarosa de grado ChIP Pierce™
Proteinasa K
Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
Especificaciones
Capacidad de unión>Capacidad de unión de 50 mg de IgG humana por ml de resina
DescripciónKit de ChIP en agarosa Pierce
FormatoKit
CantidadKit para 30 reacciones
Suficiente para30 reacciones
Capacidad (métrico)Unión de resina de ≥ 50 mg de IgG humana por ml
Línea de productosPierce
TipoKit de ChIP en agarosa
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
Suficiente para: 30 experimentos completos de ensayo IP de cromatina• Proteína A/G Plus agarosa para ChIP, 0,65 ml (almacenar a 4 °C)
• Tampón de dilución/lavado IP (5x), 11 ml (almacenar a 4 °C)
• Tampón de lavado 3 IP (5x), 4,5 ml (almacenar a 4 °C)
• Tampón de elución IP (2x), 4,5 ml (almacenar a 4 °C)
• Paquete de accesorios para columnas, 3 paquetes (almacenar a temperatura ambiente o 4 °C)
• Tubos de microcentrífuga (1,5 ml), 75 tubos (almacenar a temperatura ambiente o 4 °C)
• Columna de limpieza de ADN, 40 columnas (almacenar a temperatura ambiente o 4 °C)
• Solución de unión de columnas de ADN, 30 ml (almacenar a temperatura ambiente o 4 °C)
• Solución de lavado de columna de ADN, 6 ml (almacenar a temperatura ambiente o 4 °C)
• Indicador de pH, 0,8 ml (almacenar a temperatura ambiente o 4 °C)
• Solución de elución de columna de ADN, 5 ml (almacenar a temperatura ambiente o 4 °C)
• Anticuerpo de anti-ARN polimerasa II, 25 µl (almacenar a –20 °C)
• IgG de conejo normal (1 mg/ml), 10 µl (almacenar a –20 °C)
• Primers de control positivo de ChIP (promotor GAPDH, específico para humano), 100 µl (almacenar a –20 °C)
• Módulo de preparación de cromatina Pierce (referencia 26158) (almacenar la proteinasa K y la nucleasa microcócica a –20 °C. Almacenar todos los demás componentes a 4 °C).

Preguntas frecuentes

I am having trouble with leaking columns while using the Pierce Agarose ChIP Kit (Cat. No. 26156). How can I resolve this issue?

It is common to experience leaking when using the columns, even when the plug is pushed in very tightly. We recommend wrapping the plug with parafilm to prevent leaking.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Protein Assays and Analysis Support Center.

With my ChIP assay (Agarose ChIP Kit/Magnetic ChIP Kit), the qPCR signal (cycle threshold) from my positive and negative controls show no difference or are very close. Why is this?

-Verify that your specific antibody (if not using the kit-provided RNA polymerase II antibody) is validated for IP. Ideally, a ChIP validated antibody is the best, but an antibody for IP has a good chance of working in ChIP.
-Ensure that your chromatin is properly digested (see Appendix A in the manual). Too much digestion as well as too little digestion will affect the success of the ChIP reaction.
-Ensure that all the chromatin has been released from the nuclei. When following the Magnetic ChIP kit instructions, MNase digestion of 4x106 cells followed by sonication to lyse the nuclei, yields about 20-50 µg for the IP. This same sequence can be used with the Agarose ChIP Kit as well. It is recommended that you start with 2–4 x 106 cells per ChIP reaction. Once a successful ChIP has been run at this cell number, it is possible to decrease the cell amount empirically. We have seen good results using as little at 10,000 cells, but this entirely depends on the cell line, target, and antibody.
-Ensure that enough DNA was used for qPCR. Typically, 30-80 ng of DNA is a good range.

With my Agarose ChIP Kit, what can cause no or low PCR signal in the experimental IP samples?

Here are possible causes and solutions:

- Insufficient amount of sample DNA added to the PCR reaction: Add more sample DNA to the PCR reaction.
- Insufficient amount of antibody added to the IP: Add more antibody to the IP.
- Antibody did not function in an IP: Verify that the antibody is qualified for CHIP or IP applications and has been handled and stored properly.

Note: Increasing the stringency of the nuclear lysis is not recommended unless there is no signal or low signal-to-noise in the IP. Excess sample can result in high background decreasing the signal of the specific signal.

With my Agarose ChIP Kit, what can cause PCR signal of the positive and negative control IP samples to be equivalent?

Here are possible causes and solutions:

- Insufficient washing of the IP complex: Include an additional wash with Buffers 2 and 3.
- Excess chromatin or antibody added to the IP: Add less chromatin or antibody.
- PCR amplification was measured outside the linear range of amplification: Decrease the number of amplification cycles used in the PCR reaction.

With my Agarose ChIP Kit, what can cause no or low PCR signal in the positive control IP samples?

Here are possible causes and solutions:

- Insufficient chromatin amount in the IP reaction: Use at least 25 µg of chromatin for each IP.
- Insufficient antibody incubation time: Incubate antibody overnight.
- Incomplete elution from the Protein A/G agarose resin: Perform elution at 65 degrees C and increase frequency of mixing.