El kit ChIP magnético Thermo Scientific Pierce proporciona un método conveniente para el aislamiento eficaz de ADN unido a cromatina mediante inmunoprecipitación (IP de cromatina) para la posterior cuantificación mediante PCR.

Características del kit de ChIP magnético:

• Rápido: se obtiene ADN purificado que está listo para PCR cuantitativa en aproximadamente 8 horas
• Eficaz y reproducible: la digestión de la nucleasa microcócica y la lisis nuclear están altamente optimizadas
• Sensible: se obtienen resultados con tan solo 10.000 células (1 x 10^4)
• Fondo bajo: los gránulos magnéticos de proteína A/G Pierce están bloqueados en un reactivo que no contiene ADN para minimizar el fondo
• Completo: se incluyen reactivos de control positivo optimizados: Anticuerpo frente a la ARN polimerasa II y primers de PCR para el promotor de GAPDH

El kit de ChIP magnético contiene suficientes reactivos para realizar 30 ensayos de inmunoprecipitación de cromatina (ChIP) con los controles apropiados usando un protocolo optimizado. El kit incluye reactivos para la lisis celular, para la captura de los complejos proteína-ADN, la reversión del entrecruzamiento y el aislamiento del ADN. Las microesferas magnéticas Pierce con proteína A/G bloqueadas proporcionan alta capacidad de unión, bajo fondo no específico y trabajan con muchos tipos de anticuerpos. Estas microesferas pueden usarse manualmente con un soporte magnético o con plataformas automáticas, como los aparatos Thermo Scientific KingFisher. También se dispone de anticuerpos ChIP validados y de calidad garantizada para su uso con el kit de ChIP magnético Pierce.

Incluye:
El kit contiene reactivos para la preparación de la cromatina, IP, purificación de ADN y controles positivos (anticuerpo y primers)

Requiere:
Agente de entrecruzamiento in vivo (como formaldehído), sonicador de micropunta (como Misonix™ Sonicator 3000), anticuerpo de elección cualificado para ChIP, primers de PCR para la secuencia de ADN de interés, mezcla patrón para PCR (contiene un colorante como SYBR™ Green, si se desea realizar una qPCR) y un termociclador para qPCR

Aplicaciones:
• Determina los sitios de interacciones proteína-ADN específicas en el ADN genómico mediante PCR o Chip-Seq
• Supervisa los efectos de las modificaciones de histonas o agentes químicos sobre la unión a ADN

Un ensayo de ChIP satisfactorio requiere la realización de una serie de pasos clave (entrecruzamiento, preparación de la cromatina e inmunoprecipitación) antes de detectar el ADN genómico diana. A nivel individual, la optimización de cada paso del protocolo ChIP puede ser laboriosa. El kit de ChIP magnético Thermo Scientific Pierce simplifica el proceso de ChIP, lo que permite resultados precisos y reproducibles.

Los complejos proteína-ADN se entrecruzaran primero in vivo con formaldehído. El kit contiene reactivos para la lísis celular y la extracción y solubilización de los complejos entrecruzados. A continuación, los complejos se incuban con un anticuerpo específico y se aíslan usando gránulos magnéticos Pierce de proteína A/G. Tras revertir los entrecruzamientos y digerir la proteína, los fragmentos de ADN resultantes se purificarán y estarán listos para PCR estándar o cuantitativa.

Más datos del producto
• Análisis de la regulación independiente y dependiente de andrógenos de la actividad transcripcional

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