Pierce™ Magnetic ChIP Kit

Das Thermo Scientific Pierce Magnetic ChIP Kit bietet eine praktische Methode für die effiziente Isolierung von Chromatin-gebundener DNA durch Immunpräzipitation (Chromatin IP) für die anschließende Quantifizierung durch PCR.

Merkmale des Magnetic ChIP-Kits:

• Schnell – Gereinigte für die quantitative PCR bereite DNA in ca. 8 Stunden
• Effizient und reproduzierbar – Micrococcus-Nucleaseverdau und Kernlyse sind hochoptimiert
• Empfindlich – Ergebnisse mit nur 10.000 Zellen (1 x 10^4) erzielen
• Geringer Hintergrund – Pierce Protein A/G Magnetbeads mit niedrigem Hintergrund werden in einem nicht-DNA-haltigen Reagenz blockiert, um den Hintergrund zu minimieren
• Komplett – Optimierte positive Kontrollreagenzien sind im Lieferumfang enthalten: RNA Polymerase II Antikörper und GAPDH Promoter PCR Primer

Das Pierce Magnetic ChIP Kit enthält Reagenzien und passende Kontrollen, die für 30 Chromatin-Immunpräzipitationen (ChIP) mit optimiertem Protokoll ausreichen. Im Kit enthalten sind Reagenzien für die Zelllyse, das Auffangen von Protein-DNA-Komplexen, die Aufhebung der Vernetzung und die Isolierung von DNA. Die blockierten Pierce Protein A/G Magnetbeads zeichnen sich durch ein hohes Bindungsvermögen sowie einen niedrigen unspezifischen Hintergrund aus und eignen sich für viele Antikörperarten. Diese Beads können manuell mit einem magnetischen Ständer oder mit einer automatisierten Plattform wie Thermo Scientific KingFisher Instrumenten verwendet werden. ChIP-validierte und qualitätsgesicherte Antikörper sind auch für die Verwendung mit dem Pierce Magnetic ChIP Kit erhältlich.

Enthält:
Kit enthält Reagenzien für die Chromatinvorbereitung, IP, DNA-Reinigung und Positivkontrollen (Antikörper und Primer)

Erfordert:
In-vivo -Crosslinker (z. B. Formaldehyd), Mikrotiterspitzensonator (z. B. Misonix™ Sonator 3000), ChIP-qualifizierter Antikörper der Wahl, PCR-Primer für die DNA-Sequenz von Interesse, PCR-Mastermix (mit Farbstoff wie SYBR™ Green, falls qPCR gewünscht) und ein qPCR-Gerät

Anwendungen:
• Bestimmen Sie Stellen spezifischer Protein-DNA-Interaktionen auf genomischer DNA durch PCR oder ChIP-Seq
• Überwachen Sie die Auswirkungen von Histonmodifikationen oder chemischen Wirkstoffen auf die DNA-Bindung

. Ein erfolgreicher ChIP-Assay erfordert eine Reihe kritischer Schritte (Vernetzung, Chromatinvorbereitung, Immunpräzipitation), bevor Sie die genomische Ziel-DNA nachweisen können. Die Optimierung dieser Einzelschritte des ChIP-Protokolls kann zeitraubend sein. Das Thermo Scientific Pierce Magnetic ChIP Kit vereinfacht den ChIP-Prozess und ermöglicht präzise und reproduzierbare Ergebnisse.

Protein-DNA-Komplexe werden zuerst in vivo mit Formaldehyd vernetzt. Das Kit enthält Reagenzien für die Lyse der Zellen sowie die Extraktion und Solubilisierung der quervernetzten Komplexe. Die Komplexe werden anschließend mit einem spezifischen Antikörper inkubiert und mit Pierce Protein A/G Magnetbeads isoliert. Nach der Umkehrung von Kreuzverbindungen und dem Proteinverdau werden die entstehenden DNA-Fragmente gereinigt und sind dann für die Standard- oder quantitative PCR bereit.

Weitere Produktdatenanalyse
• Analyse der von Androgen-abhängigen und -unabhängigen Regulation transkriptioneller Aktivitäten

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