El kit rápido de isotipado de anticuerpos de ratón kappa y lambda Thermo Scientific Pierce Plus es un kit de un solo uso basado en un casete para la determinación de la identidad de la clase y subclase de anticuerpos monoclonales de ratón mediante un ensayo de flujo lateral de 5 minutos.

Este kit de isotipado de anticuerpos utiliza cartuchos que proporcionan una lectura en color del isotipo del anticuerpo monoclonal en un plazo de cinco minutos después de pipetear una pequeña cantidad de sobrenadante de cultivo diluido o muestra de líquido ascítico en el pocillo de la muestra. El kit determina la IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3, IgA e IgM de ratón, así como la identidad de la cadena ligera (cadenas ligeras kappa frente a lambda).

Características del kit rápido de isotipado de anticuerpos de ratón Pierce:

• Larga vida útil: estable durante al menos un año a temperatura ambiente
• Un solo paso: añada la muestra de anticuerpos diluidos al pocillo de carga del casete
• Rápido: en 5 minutos aparece una banda que indica el isotipo de los anticuerpos
• Sensible: detecte anticuerpos en medios de cultivo de tejidos o muestras de líquido ascítico en cualquier concentración superior a 10 ng/ml
• Específico: el ensayo no presenta reacción cruzada con el suero fetal bovino (FBS)
• Fiable: los resultados son similares a los de los ensayos estándar de isotipos basados en ELISA

Cada ensayo del kit rápido de isotipado Pierce consiste simplemente en añadir una muestra de sobrenadante de cultivo celular o una muestra de ascitis de ratón adecuadamente diluido al pocillo del pequeño casete. Los conjugados de oro incluidos en el casete forman complejos solubles específicos de clase y subclase con los anticuerpos de la muestra. Estos complejos recorren la longitud de la membrana y se resuelven en la membrana impregnada con anticuerpos específicos de clase y anti-isotipo. Los resultados se muestran como una banda roja que indica el isotipo o subclase del anticuerpo.

Determinar la clase y subclase de un anticuerpo monoclonal es útil para planificar el mejor método de purificación de las inmunoglobulinas. Por ejemplo, la IgA y la IgM se purifican mejor por tamaño (p.ej., electroforesis en gel) o utilizando columnas de separación por inmunoafinidad. Los anticuerpos IgG2a e IgG2b de ratón se purifican con la proteína A inmovilizada a un pH de 7 a 8, mientras que el anticuerpo IgG1 de ratón se une mejor a la proteína A a un pH de 8 a 9. La inmunoglobulina que contiene cadenas ligeras kappa se puede purificar con la proteína L. inmovilizada

. El kit de isotipado rápido Pierce es compatible tanto con el sobrenadante de cultivo tisular como con el líquido de ascitis de ratón, y es más sensible que los ensayos de tira reactiva convencionales con partículas de látex y mucho más rápido que los ensayos de isotipado basados en ELISA. El kit requiere solo 0,5 µl de líquido de ascitis, de 5 a 55 µl de sobrenadante de cultivo celular o 1,5 ng de anticuerpo purificado.

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