Pierce™ Monomeric Avidin UltraLink™ Resin

La resina Thermo Scientific Pierce UltraLink avidina monomérica es ideal para la purificación por afinidad de proteínas biotiniladas, péptidos y otras moléculas. La inmovilización de monómeros de avidina da como resultado una resina de purificación con una afinidad de unión de biotina mucho menor que la avidina tetramérica nativa, permitiendo la recuperación de moléculas biotiniladas utilizando condiciones de elución suaves.

La proteína de avidina monomérica inmovilizada se une a la biotina con alta especificidad y afinidad moderada, lo que permite que las moléculas no biotinas se laven y, luego, que las moléculas etiquetadas con biotina enlazadas se eluyan de forma competitiva utilizando biotina de 2 mM en solución salina tamponada con fosfato (PBS). La técnica facilita las condiciones de elución más suaves para la purificación de proteínas biotiniladas y evita tanto la contaminación como los demás problemas asociados con los métodos de avidina y estreptavidina tradicionales. La columna de avidina monomérica puede regenerarse utilizando 0,1 M de glicina para eliminar la columna de con enlace de biotina residual sin perder la capacidad de unirse a otra muestra biotinilada.

Con avidina o estreptavidina típica, la afinidad de unión de la biotina (Kd = 10^-15M) es tan grande que la purificación con estos medios tradicionales requiere de condiciones desnaturalizantes para la elución, como 8 M de guanidina·HCl con pH 1,5 o la ebullición en tampón de carga de muestra reductor para SDS-PAGE. Además de sus efectos adversos sobre la proteína biotinilada de interés, estas duras condiciones de elución suelen causar proteínas extrañas (es decir, subunidades de avidina o estreptavidina) que se eliminan de la resina y se eluyen conjuntamente con el producto de purificación deseado. En contraste, cuando la avidina se acopla a una resina (por ejemplo, agarosa granulada entrecruzada o resina UltraLink) como monómero de la subunidad, mantiene su especificidad para la biotina aunque su afinidad de unión con biotina disminuye a un nivel (Kd = 10^-8M) que genera la elución subsiguiente.

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