Y-PER™ Plus Dialyzable Yeast Protein Extraction Reagent

El reactivo dializable de extracción de proteínas de levaduras Thermo Scientific Y-PER-Plus lisa de forma eficaz las células de levadura y bacterias para extraer y solubilizar proteínas para su análisis.

Características del reactivo dializable de extracción de proteínas de levaduras Y-PER Plus:

• Formulación estable diseñada para un almacenamiento a temperatura ambiente
• Consigue extraer proteínas con una sencilla incubación manual de 20 minutos
• No precisa interrupción mecánica rigurosa ni tratamientos enzimáticos prolongados
• El tampón basado en Tris tiene una fuerza iónica muy baja y no incluye cloruro sódico
• Formulación sencilla que no contiene agentes reductores ni quelantes
• Completamente dializable para un intercambio completo de la proteína extraída en cualquier tampón requerido por técnicas posteriores
• Compatible con los ensayos de proteínas Thermo Scientific Pierce BCA y Coomassie Plus

Detalles del producto (recomendaciones de uso):
• Células frescas y congeladas: El reactivo Y-PER-Plus es capaz de extraer proteínas con la misma eficacia tanto si son células recién cosechadas como si son células congeladas
• Densidad celular y variación de cepa: Las diferencias en la velocidad de crecimiento entre organismos, la temperatura de crecimiento y la composición de los medios afecta al número de células recogidas de un determinado volumen de cultivo celular. Por lo tanto, se incluyen diversas sugerencias sobre la cantidad de reactivo Y-PER-Plus que debe utilizarse para un determinado peso de sedimento celular (pasta celular húmeda).
• Pichia pastoris: Para conseguir la lisis de células cultivadas en medios ricos, como YEPD, es necesario recoger las células durante la proliferación en la fase de registro. Para mejorar la lisis de las células en la fase estacionaria, añada DTT o TCEP-HCl (a una concentración final de 0,1 M y de 20 a 50 mM, respectivamente) directamente al reactivo Y-PER-Plus antes de la lisis para liberar muchas más proteínas solubles. Para obtener los mejores resultados, utilice de 2,5 a 5,0 ml de reactivo Y-PER-Plus por 1 gramo de pasta celular; aumente o reduzca la escala según sea necesario. Como alternativa a la incorporación de agentes reductores, puede añadir un inhibidor de proteasa e incubar a 45°C.
• Saccharomyces cerevisiae: Para obtener los mejores resultados, recoja las células durante la fase de registro. Para aumentar el resultado de las células en fase estacionaria, añada DTT o TCEP·HCl (a una concentración final de 0,1 M y de 20 a 50 mM, respectivamente) directamente al reactivo Y-PER-Plus antes de la extracción. No hay diferencias en la eficacia de los resultados para medios definidos como ricos o sintéticos. Para obtener los mejores resultados, utilice de 2,5 a 5,0 ml de reactivo Y-PER Plus por 1 gramo de pasta celular; aumente o reduzca la escala según sea necesario.
• Schizosaccharomyces pombe: Para obtener los mejores resultados, utilice el reactivo Y-PER original (n.º de referencia 78990) para extraer proteínas de S. pombe.
• Bacillus subtilis: El reactivo Y-PER-Plus no extrae proteínas de las esporas de B. subtilis. Si utiliza una cepa capaz de esporular, recolecte las células durante la fase de registro. Para cepas incapaces de esporular, las células pueden proliferar hasta la saturación antes de su recogida. Utilice de 2,5 a 5,0 ml de reactivo Y-PER-Plus por 1 gramo de pasta celular; aumente o reduzca la escala según sea necesario.
• Escherichia coli: Utilice de 2,5 a 5,0 ml de reactivo Y-PER-Plus por 1 gramo de pasta celular; aumente o reduzca la escala según sea necesario.
• Actividad enzimática: Dado que todas las proteínas son diferentes en estructura, solubilidad y estabilidad, es posible que una proteína concreta no mantenga su actividad óptima en presencia del reactivo Y-PER-Plus. Por ejemplo, el reactivo Y-PER original funciona bien en ensayos de actividad beta-galactosidasa, pero el reactivo Y-PER-Plus ralentiza su cinética. El reactivo Y-PER-Plus es compatible con los protocolos estándar de purificación por afinidad para la glutatión S-transferasa (GST) y las proteínas etiquetadas con His.

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