Y-PER™ Yeast Protein Extraction Reagent

Thermo Scientific Y-PER Yeast Protein Extraction Reagent ist das erste im Handel erhältliche Lysereagenz für Hefezellen. Es verwendet ein mildes Lysedetergenz für die wirksame Freisetzung von funktionell aktiven, solubilisierten Proteinen.

Merkmale des Y-PER Yeast Protein Extraction Reagenz:

• Mehr Protein – Extrahiert mehr als doppelt so viel Protein wie die Methode mit Glasbeads
• Weniger Aufwand – Beseitigt die Schwierigkeiten, die mit der traditionellen Glasbeads-Lyse verbunden sind (z. B. das Anhaften von statisch geladenen Beads, Protein-Bead-Klumpen und nicht kontrollierbaren Beads)
• Optimiert für Hefe – Validiert für die Verwendung mit Saccharomyces cerevisiae, Schizosaccharomyces pombe und Pichia pastoris
• Vielseitig – Wirksam für viele verschiedene Organismen, einschließlich Bacillus subtilus sowie gram-positive als und gram-negative Bakterien; geeignet für den Einsatz in einer Vielzahl von Situationen

Der auf Detergenz basierende Zelllysepuffer macht die Verwendung von Glasbeads oder mechanischen Behandlungen mit starken Reduktionsmitteln, Chemikalien, pH- und Temperaturextremen überflüssig, um den für die Proteinextraktionen erforderliche Aufschluss der proteinhaltigen Zellhülle zu bewirken. Das häufig verwendete Glasbeads-Lyseprotokoll erfordert Spezialausrüstungen und muss bei 4 °C erfolgen. Aufgrund der Denaturierung der Proteine und der unspezifischen Bindung der Proteine an Glasbeads ist die Proteinausbeute bei dieser Technik häufig mager. Y-PER Reagenz verwendet jedoch ein einfaches Protokoll für Raumtemperatur, das in 20 Minuten abgeschlossen werden kann und keine spezielle Ausrüstung erfordert.

Das Y-PER Reagenz bietet ein anwenderfreundliches Standardprotokoll für Proteinextraktionen, bei dem ein angemessenes Volumen an Y-PER Reagenz in pelletierte Hefezellen gegeben wird, gefolgt von einer Inkubation bei Raumtemperatur für ca. 20 Minuten und anschließendem Abzentrifugieren der Zellreste. Der resultierende Überstand ist eine konzentrierte Proteinlösung, die die typischen Erträge übertrifft, die mit dem üblichen Aufbruch mit Glasbeads erzielt werden.

Die Tatsache, dass es sich bei Hefen um Einzeller handelt, kombiniert mit ihrer Fähigkeit, post-translationale Modifikationen durchzuführen, die Prozesse in höheren Eukaryoten imitieren, haben sie zu wichtigen Forschungswerkzeugen gemacht. Die vielen verfügbaren Vektoren sowie die Entwicklung von rekombinanten Expressionssystemen haben Hefen im Forschungsbereich eine unersetzliche Rolle eingeräumt.Y-PER Reagenz ist für S. cerevisiae und andere beliebte Arten wirksam und eignet sich daher für die Verwendung in Fusionsproteine und Reporter-Enzym-Assays mit diesen Modellorganismen. Das Lysereagenz kann auch für die Extraktion von genomischer und Plasmid-DNA aus Hefe verwendet werden.

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