Y-PER™ Plus Dialyzable Yeast Protein Extraction Reagent

Thermo Scientific Y-PER-Plus Dialysierbares Reagenz zur Hefeproteinextraktion lysiert Hefe und Bakterienzellen effektiv und ermöglicht so die Extraktion und Solubilisierung von Proteinen für nachfolgende Analysen.

Merkmale von Y-PER Plus dialysierbarem Reagenz zur Hefeproteinextraktion:

• Stabile, für die Lagerung bei Raumtemperatur konzipierte Formulierung
• Proteinextraktion durch 20-minütige Inkubation
• Erfordert weder energische mechanische Mittel zum Zellaufbruch noch langwierige enzymatische Behandlungen
• Der Tris-basierte Puffer hat eine sehr geringe Ionenstärke und enthält kein Natriumchlorid
• Einfache Formulierung ohne Reduktionsmittel oder Chelatbildner
• Die vollständig dialysierbare Formulierung ermöglicht den vollständigen Austausch des extrahierten Proteins in jeden Puffer, der für nachgelagerte Verfahren erforderlich ist
• Sowohl mit Thermo Scientific Pierce BCA als auch mit Coomassie Plus Proteinassays kompatibel

Produktdetails (Empfohlene Anwendung):
• Frischzellen und gefrorene Zellen: Das Y-PER-Plus Reagenz eignet sich gleichermaßen gut für die Proteinextraktion aus frisch geernteten und gefrorenen Zellen
• Abweichungen hinsichtlich Zelldichte und Stämmen: Unterschiede zwischen den Wachstumsraten der Organismen, Wachstumstemperatur und Zusammensetzung der Kulturmedien beeinflussen die Anzahl der Zellen, die aus einem bestimmten Kulturvolumen gewonnen werden können. Daher werden verschiedene Empfehlungen für die Menge an Y-PER-Plus-Reagenz ausgesprochen, die für ein bestimmtes Gewicht des Zellpellets (nasse Zellpaste) eingesetzt werden sollte.
• Pichia pastoris: Für die Lyse von Zellen, die in einem reichhaltigen Medium wie YEPD gezüchtet wurden, muss die Ernte während der logarithmischen Wachstumsphase erfolgen. Um die Zelllyse während der stationären Wachstumsphase zu verstärken, wird dem Y-PER-Plus Reagenz direkt vor der Lyse entweder DTT oder TCEP-HCl (in einer Endkonzentration von 0,1 M bzw. 20 bis 50 mM) beigefügt, um die Freisetzung löslicher Proteine wesentlich zu erhöhen. Die besten Ergebnisse lassen sich mit einem Verhältnis von 2,5 bis 5,0 ml Y-PER-Plus Reagenz zu 1 g Zellpaste erzielen; entsprechend nach oben oder unten korrigieren. Eine Alternative für den Zusatz von Reduktionsmitteln ist der Rückgriff auf einen Protease-Inhibitor und Inkubation bei 45 °C.
• Saccharomyces cerevisiae: Für optimale Ergebnisse sollte die Zellernte in der logarithmischen Wachstumsphase erfolgen. Um die Zellausbeute während der stationären Wachstumsphase zu verstärken, wird dem Y-PER-Plus Reagenz direkt vor der Extraktion entweder DTT oder TCEP·HCl (in einer Endkonzentration von 0,1 M bzw. 20 bis 50 mM) beigefügt. Es gibt keinen Unterschied zwischen dem Effizienzgrad bei definierten Voll- oder synthetischen Nährmedien. Die besten Ergebnisse lassen sich mit einem Verhältnis von 2,5 bis 5,0 ml Y-PER-Plus Reagenz zu 1 g Zellpaste erzielen; entsprechend nach oben oder unten korrigieren.
• Schizosaccharomyces pombe: Für optimale Ergebnisse sollte das originale Y-PER Reagenz (Artikelnr. 78990) für die Proteinextraktion aus S. pombe verwendet werden.
• Bacillus subtilis: Das Y-PER-Plus Reagenz extrahiert kein Protein aus B. subtilis-Sporen. Bei Verwendung eines Sporen-bildenden Stammes müssen die Zellen während der logarithmischen Wachstumsphase geerntet werden. Für Stämme, die keine Sporen bilden, können die Zellen vor der Ernte bis zur Sättigung gezüchtet werden. Verwenden Sie 2,5 bis 5,0 ml Y-PER-Plus Reagenz pro 1 g Zellpaste und korrigieren entsprechend nach oben oder unten.
• Escherichia coli: Verwenden Sie 2,5 bis 5,0 ml Y-PER-Plus Reagenz pro 1 g Zellpaste und korrigieren Sie entsprechend nach oben oder unten.
• Enzymaktivität: Da sich alle Proteine im Hinblick auf Struktur, Löslichkeit und Stabilität unterscheiden, kann es vorkommen, dass ein besonderes Protein bei Vorhandensein von Y-PER-Plus Reagent keine optimale Aktivität entfaltet. Beispielsweise eignet sich das originale Y-PER Reagenz gut für die Untersuchung der Beta-Galactosidase-Aktivität, während das Y-PER-Plus Reagenz die Kinetik dieses Enzyms verlangsamt. Y-PER-Plus Reagenz ist mit Standardprotokollen der Affinitätsreinigung von Glutathion-S-Transferase (GST) und His-tagged Proteinen kompatibel.

Ähnliche Produkte
Y-PER™ Reagenz für Hefeproteinextraktion