Kit de fraccionamiento de péptidos de fase inversa de pH alto Pierce™
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Thermo Scientific™
Kit de fraccionamiento de péptidos de fase inversa de pH alto Pierce™
El kit de fraccionamiento de péptidos de fase inversa y pH alto Thermo Scientific™ Pierce™ aumenta la identificación de proteínasMás información
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84868
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El kit de fraccionamiento de péptidos de fase inversa y pH alto Thermo Scientific™ Pierce™ aumenta la identificación de proteínas a partir del análisis de LC-MS mediante el fraccionamiento de péptidos ortogonales de muestras de péptidos complejas.
• Fácil de usar: se proporciona resina en formato de columna de centrifugación de un solo uso • Mejora de las identificaciones de proteínas: las identificaciones de proteínas han aumentado en un ≥50 % en comparación con muestras no fraccionadas • Reproducible: los perfiles de elución y la resolución fraccional varían menos del 20 % • Optimizado: procedimiento sólido para la máxima identificación de proteínas y recuperación de péptidos al tiempo que se minimiza la superposición fraccional • Compatible: reactivos validados con una variedad de muestras complejas, incluidos péptidos con etiqueta TMT™
Para permitir la secuenciación profunda de proteomas, a menudo es necesario reducir la complejidad de la muestra mediante un fraccionamiento en una dimensión ortogonal antes del análisis de LC-MS. El kit de fraccionamiento de péptidos de fase inversa y pH alto Pierce utiliza cromatografía de fase inversa de pH alto para separar péptidos por hidrofobicidad y proporciona una excelente ortogonalidad a gradientes de LC-MS de fase inversa de pH bajo.
El kit se ha diseñado para mejorar la identificación de proteínas mediante el uso de una resina de fase inversa patentada en un formato de columna de centrifugación fácil de usar con un protocolo de fraccionamiento de pH alto. En contraste con el fraccionamiento de intercambio de cationes fuerte (SCX), las fracciones de fase inversa de pH alto no requieren un paso de desalinización adicional antes del análisis de LC-MS.
El kit de fraccionamiento de péptidos de fase inversa y pH alto incluye un tampón de pH alto (0,1 % de trietilamina) y doce columnas de centrifugación que contienen resina de fase inversa resistente al pH. Cada columna de centrifugación de fraccionamiento de fase inversa permite el fraccionamiento de entre 10 y 100 µg de muestra de péptidos mediante una microcentrífuga.
Con este kit se pueden fraccionar muestras nativas, fosforiladas, con etiqueta TMTTM (etiquetas de masa en tándem TM) y otras mezclas de péptidos complejas. La combinación de los resultados de búsqueda generados por las fracciones individuales ayuda a mejorar la cobertura de la secuencia de proteínas y aumenta el número de proteínas identificadas en relación con las muestras no fraccionadas.
Aplicaciones: • Reducción de la complejidad de las muestras para identificar dianas de interés • Realización de estudios de biología de sistemas • Reducción de la complejidad de las muestras
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.
Especificaciones
Tipo de producto finalpéptidos
Para utilizar con (equipo)Microcentrífuga
Cantidad12 reacciones
Paso del flujo de trabajoFraccionamiento
Método de detecciónEspectrometría de masas
FormatoKit
Línea de productosPierce
Tipo de productoKit de fraccionamiento de péptidos
Material de partidaPéptidos, proteína digerida por proteasa
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
Columnas de centrifugación de fraccionamiento de fase inversa, 12 columnas Trietilamina (0,1 %), 100 ml
Almacenar en refrigerador (2–8 °C).
Preguntas frecuentes
Can I purchase the Reversed-Phase Fractionation Spin Columns from the Pierce High pH Reversed-Phase Peptide Fractionation Kit (Cat. No. 84868) separately?
No, the spin columns from this kit cannot be purchased separately. However, if you are only using these columns to remove salts from your peptide samples, you can purchase the Pierce Peptide Desalting Spin Columns (Cat. No. 89851, 89852), as an alternative.
How much starting material is needed to fractionate my samples using the Pierce High pH Reversed Phase Fractionation Kit (Cat. No. 84868)?
A minimum of 100 µg of protein as starting material from the digestion step is needed for fractionation using eight fractions. Less starting material would be needed if fewer fractions are used. If peptides are being measured, the range of peptide to be loaded on these columns is 10 to 100 µg.
I want to fractionate a complex mass spectrometry sample, but my sample is different from the one described in the manual for the Pierce High pH Reversed-Phase Peptide Fractionation Kit. Should I use a customized fractionation gradient?
Recommended gradients are available for typtic protein digest samples with or without TMT labeling. Use of other chemical labels, performing selective peptide enrichment, or using a different digestion enzyme other than trypsin may affect the elution profile of the peptides during fractionation. For the best sample peptide coverage, an ideal elution profile would result in relatively equal amounts of peptides in each fraction.
After running the Pierce TMT11plex Yeast Digest Standard, I observe low signal to noise ratio and poor quantitation accuracy for the Tandem Mass Tag (TMT) reporter ions. What do you recommend?
Here are some recommendations:
- Clean and recalibrate the mass spectrometry instrument using one of our Pierce Calibration Solutions (https://www.thermofisher.com/search/browse/category/us/en/600654).
- Verify settings for liquid chromatography (LC) acquisition methods.
- Fractionate TMT-labeled samples using the Pierce High pH Reversed-Phase Peptide Fractionation Kit (Cat. No. 84868) to reduce sample complexity.
I have a lower number of peptide/protein identification in my combined TMT-labeled samples compared to the unlabeled sample. What can I do?
We recommend fractionating the sample using the Pierce High pH Reversed-Phase Peptide Fractionation Kit (Cat. No. 84868), to reduce the sample complexity before LC-MS analysis and thus increase the number of quantifiable peptides/proteins for multiplexed samples.
Targeted Protein Degradation through Recruitment of the CUL4 Complex Adaptor Protein DDB1
Authors:Meyers M, Cismoski S, Panidapu A, Chie-Leon B, Nomura DK.
Journal:ACS Chem Biol
PubMed ID:38192078
Targeted protein degradation has arisen as a powerful therapeutic modality for eliminating proteins. Thus far, most heterobifunctional proteolysis targeting chimeras (PROTACs) have utilized recruiters against substrate receptors of Cullin RING E3 ubiquitin ligases, such as cereblon and VHL. However, previous studies have surprisingly uncovered molecular glue degraders that exploit a ... More
Generating high quality libraries for DIA MS with empirically corrected peptide predictions.
Authors:Searle BC,Swearingen KE,Barnes CA,Schmidt T,Gessulat S,Küster B,Wilhelm M
Journal:Nature communications
PubMed ID:32214105
Data-independent acquisition approaches typically rely on experiment-specific spectrum libraries, requiring offline fractionation and tens to hundreds of injections. We demonstrate a library generation workflow that leverages fragmentation and retention time prediction to build libraries containing every peptide in a proteome, and then refines those libraries with empirical data. Our method ... More
Proteomics of prostate cancer serum and plasma using low and high throughput approaches
Despite progress, MS-based proteomics in biofluids, especially blood, faces challenges such as dynamic range and throughput limitations in biomarker and disease studies. In this work, we used cutting-edge proteomics technologies to construct label-based and label-free workflows, capable of quantifying approximately 2,000 proteins in biofluids. With 70µL of blood and a ... More