ARNm de nucleasa CRISPR GeneArt™

El ARNm de nucleasa CRISPR GeneArt™ se formula utilizando un nuevo proceso de fabricación para lograr una calidad superior y un mejor rendimiento del producto. Este ARNm Cas9 de tipo natural tiene dos señales de localización nuclear (NLS). Se ha demostrado que las construcciones Cas9 con dos NLS son más eficaces para dirigir la proteína Cas9 al núcleo (1). El formato de ARNm está listo para transfectar y evita los engorrosos pasos de clonación necesarios al utilizar los sistemas de vectores CRISPR. ARNm Cas9 se cotransfecta con un ARN guía (ARNg) específico del objetivo para dirigir la proteína Cas9 al locus del genoma deseado con el fin de crear una fragmentación bicatenaria. El formato de ARN completo es una carga menor que los sistemas Cas9 basados en plásmidos para un suministro mejorado a la célula y una mayor eficacia de edición del genoma. Además, el ARNm Cas9 se puede utilizar para enfoques de multiplexing con más de un ARNg. Utilice este método para determinar qué secuencia de ARNg funciona mejor para un objetivo concreto o para editar múltiples loci genómicos con una transfección.

¿Cómo se obtiene una secuencia de ARNg?
La edición del genoma con tecnología CRISPR requiere un ARN guía no codificante (ARNg) para escindir el ADN genómico en una secuencia objetivo de interés. El ARNg tiene dos componentes moleculares: un ARN CRISPR (ARNcr) específico del objetivo y un ARNcr transactivante (tracrRNA) que se han combinado en una transcripción. La secuencia objetivo (20 bases) debe ser inmediatamente anterior a un motivo PAM (NGG) que permita al Cas9 iniciar la unión. El PAM está solo en el ADN objetivo y no forma parte de la secuencia CRISPR específica del objetivo. El ARNg y el motivo PAM guían a la nucleasa Cas9 a la secuencia genómica objetivo para formar un complejo y crear una ruptura roma de ADN bicatenaria (DSB) tres nucleótidos antes del sitio PAM.

Use nuestra herramienta de diseño y búsqueda GeneArt CRISPR para buscar en nuestra base de datos de > 600 000 secuencias de ARNg específicas para cada gen en los genomas humano y de ratón. Los ARNg GeneArt prediseñados están optimizados para Knockout genético y se centran normalmente en los tres primeros exones transcritos para cada gen. Los resultados de la búsqueda incluyen recomendaciones basadas en la minimización de los posibles efectos fuera del objetivo, sitios potenciales de unión y mapas de exón con ubicaciones de ARNg. Esta herramienta también puede usarse para analizar cualquier secuencia de interés para diseñar secuencias CRISPR únicas.

Cómo hacer el ARNg
Una vez seleccionadas las secuencias de ARNg, elija entre tres opciones para hacer el ARNg:
1. Kit de síntesis de ARNg GeneArt Precision para el ARNg listo para transfección en tan solo cuatro horas, incluido el ensamblaje del molde.
2. GeneArt CRISPR Strings, que es una plantilla de ADN sintético que consiste en el ARNg con un promotor T7 para la transcripción in vitro o un promotor U6 para tener un formato listo para transfectar y que se puede comprar a través de la herramienta de diseño y búsqueda GeneArt CRISPR o completando el formulario GeneArt CRISPR Strings de pedidos de ADN y enviándolo a GeneArtSupport@lifetech.com.
3. Ahorre tiempo y esfuerzo y pida a nuestro equipo de servicios personalizados GeneArt que le diseñe, sintetice y purifique secuencias de ARNg transcritas in vitro (IVT). Para obtener un presupuesto de los servicios o realizar un pedido, comuníquese con nuestro departamento de servicios personalizados llamando al 1-800-955-6288 x45682 o escribiendo a custom.services@lifetech.com.

Recursos
Protocolo demostrado: Ingeniería de células madre con CRISPR-Cas9

Referencias
1.Cong L., Ran F. A., Cox D., Lin S., Barretto R., Habib N., Hsu P. D., Wu X., Jiang W., Marraffini L. A., Zhang F. (2013) Multiplex Genome Engineering Using CRISPR/Cas Systems. Science 339(6121):819-23.