Sulfo-NHS-LC-destiobiotina EZ-Link™, formato No-Weigh™

Sulfo-NHS-LC-destiobiotina Thermo Scientific EZ-Link es un reactivo de etiquetado de cadena larga y reactivo a la amina cuyo grupo similar a la biotina se puede eluir a partir de la estreptavidina, lo que lo hace ideal para el etiquetado y purificación de proteínas de superficie celular.

Características de Sulfo-NHS-LC-destiobiotina EZ-Link:

• Destiobiotina: como análogo de la biotina, permite una fácil elución a partir de la estreptavidina, una característica ideal para aplicaciones de purificación por afinidad
• Etiquetado de proteínas: marque anticuerpos o proteínas en muestras purificadas o mezcladas para permitir una mayor recuperación en ensayos de «pull-down» con gránulos de estreptavidina
• Etiquetado de superficie celular: modifica únicamente las proteínas superficiales de células completas, ya que el reactivo con carga negativa no penetra en la membrana
• Reactivo a amina: reacciona con aminas primarias (-NH2), como cadenas laterales de lisina o el extremo amino de los polipéptidos
• Soluble: el grupo sulfo-NHS cargado aumenta la solubilidad en agua del reactivo en comparación con los compuestos de éster de N-hidroxisucinimida (NHS) corrientes

La sulfo-NHS-LC-destiobiotina es una variante de la biotina que se activa como un éster de sulfo-NHS con un grupo separador de cadena larga (LC) para etiquetar covalentemente aminas primarias (-NH2) de proteínas u otras moléculas con grupos de destiobiotina. La etiqueta de la destiobiotina se une a la estreptavidina y a otras proteínas de unión a la biotina con alta especificidad, pero se eluye fácilmente con condiciones leves (es decir, por desplazamiento competitivo con biotina regular y libre). Como tal, este reactivo es una alternativa útil a la Sulfo-NHS-LC-biotina (n.° de referencia 21335) para las técnicas de avidina-biotina en las que se desea obtener la elución no condenaturante de las proteínas etiquetadas. El grupo sulfo-NHS con carga negativa evita que este reactivo penetre en las membranas celulares; por lo tanto, la sulfo-NHS-LC-destiobiotina puede usarse para limitar el etiquetado a las proteínas de la superficie celular de las células intactas. El formato No-Weigh (5 x 1 mg de viales resellables) elimina las dificultades asociadas de pesar pequeñas cantidades de reactivo y maximiza la protección del reactivo no utilizado contra la hidrolisis.

Destiobiotina vs. biotina
La destiobiotina es un análogo de la biotina sin azufre de un solo anillo que se une a la estreptavidina con una especificidad casi igual, pero menos afinidad que la biotina (1/Kd = 10¹¹ vs. 10¹⁵M, respectivamente). En consecuencia, las proteínas de cebo destiobiotiniladas y sus elementos de interacción pueden eludirse fácilmente y específicamente a partir de la resina de afinidad de estreptavidina utilizando condiciones leves basadas en el desplazamiento competitivo con biotina libre. Para experimentos de ensayos de precipitación con muestras biológicas, esta característica de liberación suave de la destiobiotina también ayuda a minimizar la copurificación de moléculas endógenas biotiniladas, que permanecen ligadas a la estreptavidina tras la elución de los complejos proteicos diana con biotina libre. El sistema modificado de afinidad de la avidina-biotina también elimina la necesidad de utilizar condiciones de elución severas que podrían desasociar complejos o dañar la proteína o célula diana. Las técnicas basadas en la destiobiotina son ideales cuando se utilizan proteínas nativas o recombinantes que no se expresan con una etiqueta de fusión y cuando se aíslan proteínas capturadas en condiciones nativas, como la focalización de células intactas o proteínas de superficie celular.

Etiquetado con reactivos de NHS de éster:
Los ésteres de N-hidroxisulfosucinimida (NHS) de la biotina son el tipo más popular de reactivo de biotinilación. Las biotinas activadas por NHS reaccionan eficazmente con grupos amino primarios (-NH2) en tampones alcalinos para formar enlaces amida estables. Las proteínas suelen tener varias aminas primarias que están disponibles como dianas de etiquetado, incluyendo la cadena lateral de residuos de lisina (K) y el extremo N de cada polipéptido. La mayoría de los ésteres del sulfo-NHS son directamente solubles en agua pero no permeables a la membrana. Los ésteres de NHS sencillos son menos solubles en tampones acuosos pero permeables a la membrana.