Kit de clonación de PCR CloneJET™ con células competentes DH10B
Kit de clonación de PCR CloneJET™ con células competentes DH10B
Thermo Scientific™

Kit de clonación de PCR CloneJET™ con células competentes DH10B

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Número de catálogoCantidad
K12324040 reacciones
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Número de catálogo K123240
Precio (MXN)
-
Cantidad:
40 reacciones
Pedido a granel o personalizado
Este paquete incluye el kit de clonación de PCR CloneJET (20 o 40 reacciones) y las células competentes DH10B que están optimizadas para su uso con el kit y se pueden transformar directamente con el producto de ligación.

Kit de clonación de PCR CloneJET
El kit de clonación de PCR Thermo Scientific CloneJET es un sistema avanzado de selección positiva para la clonación de alta eficiencia de productos de PCR generados con cualquier ADN polimerasa termoestable. Se puede clonar cualquier fragmento de ADN con extremos cohesivos o romos. El kit funciona bien con fragmentos de ADN fosforilados y no fosforilados. La ligadura al vector de selección positiva incluido solo tarda unos 5 minutos y produce más del 99 % de clones recombinantes. Los productos de PCR de extremo romo generados con una enzima de corrección se ligan directamente en el vector de clonación.

Los productos de PCR generados con ADN polimerasas no de corrección o con mezclas de ADN polimerasas se tienen que despuntar antes de la ligadura en una reacción de 5 minutos con la enzima de conversión en extremos romos del ADN termostable que se proporciona con el kit. Las células competentes DH10B están optimizadas para su uso con el kit de clonación de PCR CloneJET y se pueden transformar directamente con el producto de ligación.

El kit de clonación de PCR CloneJET contiene el nuevo vector de clonación de selección positiva listo para usar pJET1.2/blunt. El vector contiene un gen enzimas de restricción letal que se interrumpe con la ligadura de un inserto de ADN en el sitio de clonación. Como resultado, solo las células bacterianas con plásmidos recombinantes pueden formar colonias. Las moléculas del vector pJET1.2/blunt recirculadas que no disponen de insertos se expresan mediante una enzima de restricción letal, que mata la célula de E. coli huésped después de la transformación. Esta selección positiva acelera drásticamente el proceso de identificación de colonias y elimina los costes adicionales necesarios para la selección de color azul/blanco.

Rápido: clonación de PCR en solo cinco minutos
Mayor eficiencia: > 99 % de los clones son positivos
Sin fondo de clonación: vector de selección positiva
Versátil: ideal para la clonación con extremos cohesivos o romos
Económico: sin la cara detección azul/blanco

Las aplicaciones incluyen:
• Clonación del extremo romo o productos de PCR con cola 3'-dA hasta de 10 kb
• Clonación de fragmentos de ADN generados por enzimas de restricción
• Secuenciación del ADN clonado
• Transcripción in vitro e in vivo de insertos clonados del promotor T7

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Células competentes DH10B
Las células competentes DH10B Thermo Scientific son células de E.coli de alta eficiencia y competencia química. La cepa DH10B es adecuada para la clonación de ADN que contiene metilcitosina y metiladenina, lo que permite clonar de forma eficaz tanto el ADN genómico procariótico como el eucariótico. Estas células son ideales para la construcción de bibliotecas de ADNc utilizando vectores derivados del plásmido. Genotipo: F– mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ (ara-leu)7697 galU galK λ– rpsL(StrR) nupG.

• Alta eficacia de transformación: > 1 x 109 cfu/µg pUC19 DNA
• Adecuado para aplicaciones de clonación rutinarias y de alto rendimiento
• Dos prácticas reacciones por envase de vial
• SOC Medio de crecimiento incluido

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Sistema de expresión y clonación aLICator LIC
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.
Especificaciones
Resistencia bacteriana a los antibióticosAmpicilina (AMPR)
Cepa bacteriana o de levaduraDH10B
Tipo de célulaDH10B
Método de clonaciónBlunt PCR, enzimas de restricción/MCS
Eficacia≥1 x 10^9
Para utilizar con (aplicación)Clonación PCR
N.º de reacciones40 reacciones
Línea de productosThermo Scientific
Tipo de productoKit de clonación de PCR
Cantidad40 reacciones
Tipo de muestraProductos de PCR
Condiciones de envíoHielo seco
VectorpJET1.2/blunt
FormatoKit
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
• 20 x DH10B células competentes para la subclonación (100 µl)
• ADN 2 x pUC19 (20 µl) (100 pg/µl)
•2 x SOC Medio (5 ml)
• Vector de clonación pJET1.2/blunt (46 µl) (50 ng/µl)
• Tampón de reacción 2X (600 µl)
• Ligasa de ADN T4 (46 µl) (5 U/µl)
• Enzima de fusión de ADN (46 µl)
• Enzima de fusión de ADN (46 µl)
• Cebador de secuenciación directa pJET1.2, 10 µm de solución acuosa (50 µl)
• Cebador de secuenciación inversa pJET1.2, 10 µm de solución acuosa (50 µl)
• Producto de PCR de control, 976 bp con salientes de 3’-da (8 µl) (12 ng/µl)
• Agua, sin nucleasas, (1,25 ml)

Preguntas frecuentes

How can I obtain the highest possible transformation efficiency with Thermo Scientific DH5α and DH10B competent cells?

To achieve the highest possible transformation efficiency with Thermo Scientific DH5α (Cat. No. EC0112) and DH10B (Cat. No. EC0113) competent cells, please follow the transformation protocol provided with the product and pay attention to the following details:

- Make sure to use wet well-pressed ice to maximize cold surface volume in all the transformation steps.
- Perform the steps quickly and accurately.
- Use chilled microcentrifuge tubes and bury the whole tube up to the cap in the wet ice.
- Do not exceed the recommended heat shock time and transfer the tube with cells back to the wet ice immediately.