Rhod-3 Calcium Imaging Kit
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Invitrogen™

Rhod-3 Calcium Imaging Kit

El novedoso kit Rhod-3 Calcium Imaging Kit está diseñado para obtener imágenes de células vivas de señalización de calcio citosólicoMás información
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Número de catálogoCantidad
R101451 kit
Número de catálogo R10145
Precio (MXN)
-
Cantidad:
1 kit
El novedoso kit Rhod-3 Calcium Imaging Kit está diseñado para obtener imágenes de células vivas de señalización de calcio citosólico en combinación con colorantes o proteínas verdes fluorescentes. El colorante rojo fluorescente Rhod-3 AM suministrado en el Rhod-3 Calcium Imaging Kit ofrece mejoras significativas con respecto a los colorantes de detección de CA2+ existentes. Se ha reducido la absorción en orgánulos, lo que se traduce en una mejor localización citosólica. Además, Rhod-3 AM exhibe un gran aumento en la emisión de fluorescencia al unirse al calcio, lo que lo hace más sensible que otros colorantes de calcio rojo-fluorescentes.

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• En comparación con los colorantes de calcio rojos existentes, Rhod-3 AM muestra un gran aumento (> 2,5 veces) en la fluorescencia al unir CA2+ y una fluorescencia muy baja en reposo (sin unión Ca2+).

• La emisión estrecha permite la detección simultánea con GFP u otros colorantes.

• Localización citosólica mejorada para una mejor detección de los transitorios citosólicos

Para facilitar la carga celular, el kit de obtención de imágenes de calcio Rhod-3 contiene concentrado PowerLoad™. Debido a la naturaleza única de la solución PowerLoad™, se puede utilizar en presencia de medios de cultivo completos, reduciendo así los efectos negativos de sustituir el medio o cargar medios sin suero.

Una forma patentada, soluble en agua de probenecid (que se utiliza habitualmente para inhibir el transporte celular y por lo tanto reduce la señal de línea de base) también se suministra con el kit Rhod-3 Calcium Imaging Kit.

Los indicadores de calcio son herramientas importantes en la transducción de señales y el cribaje farmacológico basado en células. En células y tejidos con autofluorescencia azul o verde, los indicadores de calcio de longitud de onda larga (es decir, desplazamiento rojo) proporcionan un medio para evitar esta autofluorescencia superpuesta. Además, los colorantes de calcio de desplazamiento rojo son adecuados para experimentos de obtención de imágenes de calcio multiplexados con proteína verde fluorescente (GFP) u otros colorantes fluorescentes verdes.

El colorante Rhod-3 AM (incluido en el Rhod-3 Calcium Imaging Kit) es un colorante de calcio a base de rodamina con desplazamiento rojo mejorado con un grupo de éster AM enlazado. Una vez dentro de la célula, las esterasas intracelulares cortan el grupo AM, atrapando el colorante en la célula y convirtiéndolo en fluorescente. A medida que el calcio se une, aumenta la intensidad de fluorescencia del colorante. Las propiedades espectrales de Rhod-3 AM (ex/em = ∼560/600 nm) y la fuerte fluorescencia sobre la unión al calcio proporcionan una excelente ventana de señal y la convierten en nuestro colorante de calcio rojo más brillante. Además, Rhod-3 AM muestra una distribución citosólica más uniforme y una señal mejorada en comparación con los colorantes de calcio rojos existentes, como el Rhod-2.
Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
Especificaciones
Método de detecciónFluorescente
Tipo de coloranteA base de colorantes fluorescentes
FormularioLiofilizado
ModificaciónNo modificado, no modificado
Cantidad1 kit
Condiciones de envíoTemperatura ambiente
Localización subcelularCitoplasma
ColorRojo
EmissionVisible
Para utilizar con (aplicación)Ensayo de calcio
Para utilizar con (equipo)Microscopio de fluorescencia
Línea de productosMolecular Probes
Tipo de productoTinte
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
El kit contiene suficientes reactivos para la tinción de 50 cubreobjetos según el protocolo proporcionado. Almacenar a 20 °C, desecado y protegido de la luz. Cuando se almacena según las indicaciones, el kit es estable durante 1 año.

Preguntas frecuentes

When using Calcium Crimson, AM, as an indicator of intracellular calcium flux, I am not getting a good degree of change. The cells also have GFP. What can I do?

This is a known drawback of Calcium Crimson, AM (as well as Calcium Orange, AM and Fura Red, AM, which are also in the same emission range). You can try increasing the concentration and washing out of any unlabeled dye from the media, to try to get better signal-to-background. If that fails, we recommend using Rhod-3 AM instead, which has a much better change in signal in that wavelength.

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Why don't I see a significant change in signal for my live-cell fluorescent indicator dye?

Regardless of the type of live-cell indicator dye (e.g., calcium indicators, pH indicator, metal ion indicators), make sure there is no serum during the loading step, which can prematurely cleave dyes with AM esters and bind dyes non-specifically. Always optimize the dye concentration and staining time with a positive control before you run your test samples, to give the best signal-to-background. Always run a positive control with a buffer containing free ions of known concentration and an ionophore to open pores to those ions (for instance, for calcium indicators like Fluo-4 AM, this would include a buffer with added calcium combined with calcimycin, or for pH indicators, buffers of different pHs combined with nigericin). Reactive oxygen indicators, such as CellROX Green or H2DCFDA would require a cellular reactive oxygen species (ROS) stimulant as a positive control, such as menadione. Finally, make sure your imaging system has a sensitive detector. Plate readers, for instance, have much lower detector efficiency over background, compared to microscopy or flow cytometry.

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Citations & References (19)

Citations & References
Abstract
Modulation by Syk of Bcl-2, calcium and the calpain-calpastatin proteolytic system in human breast cancer cells.
Authors:Fei B, Yu S, Geahlen RL,
Journal:
PubMed ID:23684705
'Syk is a 72kDa non-receptor tyrosine kinase that is best characterized in hematopoietic cells. While Syk is pro-tumorigenic in some cancer cell types, it also has been reported as a negative regulator of metastatic cell growth in others. An examination of the RelA (p65) subunit of NF-?B expressed in MCF7 ... More
Direct reprogramming of fibroblasts into functional cardiomyocytes by defined factors.
Authors:Ieda M, Fu JD, Delgado-Olguin P, Vedantham V, Hayashi Y, Bruneau BG, Srivastava D,
Journal:Cell
PubMed ID:20691899
'The reprogramming of fibroblasts to induced pluripotent stem cells (iPSCs) raises the possibility that a somatic cell could be reprogrammed to an alternative differentiated fate without first becoming a stem/progenitor cell. A large pool of fibroblasts exists in the postnatal heart, yet no single ' ... More
Induction of human cardiomyocyte-like cells from fibroblasts by defined factors.
Authors:Wada R, Muraoka N, Inagawa K, Yamakawa H, Miyamoto K, Sadahiro T, Umei T, Kaneda R, Suzuki T, Kamiya K, Tohyama S, Yuasa S, Kokaji K, Aeba R, Yozu R, Yamagishi H, Kitamura T, Fukuda K, Ieda M,
Journal:
PubMed ID:23861494
'Heart disease remains a leading cause of death worldwide. Owing to the limited regenerative capacity of heart tissue, cardiac regenerative therapy has emerged as an attractive approach. Direct reprogramming of human cardiac fibroblasts (HCFs) into cardiomyocytes may hold great potential for this purpose. We reported previously that induced cardiomyocyte-like cells ... More
MKP3 eliminates depolarization-dependent neurotransmitter release through downregulation of L-type calcium channel Cav1.2 expression.
Authors:Mortensen OV,
Journal:Cell Calcium
PubMed ID:23337371
'Release of neurotransmitters is a fundamental and regulated process that is essential for normal brain functioning. Regulation of this process is potentially important for any neuronal process, and disruption of the release process may contribute to the pathophysiology associated with psychiatric diseases. In this work it is shown that expression ... More
Neprilysin deficiency protects against fat-induced insulin secretory dysfunction by maintaining calcium influx.
Authors:Zraika S, Koh DS, Barrow BM, Lu B, Kahn SE, Andrikopoulos S,
Journal:Diabetes
PubMed ID:23328128
'Neprilysin contributes to free fatty acid (FFA)-induced cellular dysfunction in nonislet tissues in type 2 diabetes. Here, we show for the first time that with prolonged FFA exposure, islet neprilysin is upregulated and this is associated with reduced insulin pre-mRNA and ATP levels, oxidative/nitrative stress, impaired potassium and calcium channel ... More
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