Descripción general

Los sistemas de PCR en tiempo real QuantStudio de Applied Biosystems pueden detectar cambios de tan solo 1,5 veces. La mayoría de los sistemas también pueden proporcionar una separación reproducible de más de 10 logs. de plantilla de entrada.

 

El software proporciona un kit de herramientas en línea para el análisis de los datos de los sistemas QuantStudio. El software aprovecha Connect, nuestra plataforma basada en la nube, para proporcionar herramientas de análisis muy versátiles que son flexibles, rápidas, fáciles de usar y facilitan la comprensión funcional de qPCR y datos relacionados.

 

Estos módulos permiten a los usuarios combinar más de 100 experimentos de genotipado, expresión génica u otros experimentos de qPCR en un proyecto y analizar los datos en cuestión de minutos. Los módulos destacados incluyen el diseño y análisis, análisis de fusión de alta resolución (HRM), análisis de presencia/ausencia, curva estándar, genotipado, análisis de cuadro de mando de hPSC y cuantificación relativa. Consulte algunos ejemplos a continuación.

Sensibilidad

Detección de una discriminación de tan solo 1,5 veces

Grupos distintos que indican una discriminación de 2 y 1,5 veces en el sistema QuantStudio 7 Pro con una confianza del 99,9 %, equivalente a otras plataformas de Applied Biosystems, QuantStudio 7 Flex y los instrumentos 7900HT. Se evaluaron muestras totales de ADNc hepático con diferencias de entrada de 2 y 1,5 veces. Las ejecuciones se analizaron con su correspondiente software de plataforma, con umbral automático y valor inicial, y luego se exportaron y analizaron con el software estadístico SAS JMP v13.

El gráfico de amplificación muestra la detección de cambios de expresión de 1,5 veces con el sistema QuantStudio 7 Pro. Se amplificó una serie de diluciones del plásmido KAZ. El eje vertical es el cambio en la fluorescencia normalizada al colorante ROX. El eje horizontal aumenta el número de ciclos de izquierda a derecha. Esto se verifica trazando una curva estándar. El eje vertical de la curva estándar es el valor umbral del ciclo y el eje horizontal es la serie de diluciones que aumenta la concentración de izquierda a derecha.

La amplificación del ADN plasmídico KAZ en diluciones de 10 veces se realizó utilizando el bloque de 96 pocillos y muestra una separación altamente reproducible sobre los 10 logs. de la cantidad de plantilla de entrada. El eje vertical es el logaritmo de la fluorescencia sustraída de fondo normalizada al colorante ROX. El eje horizontal aumenta el número de ciclos de izquierda a derecha.

Detección de copia única

Una copia única de plásmido KAZ en azul en comparación con NTC en morado. El sistema QuantStudio 7 Pro detecta de forma consistente una copia única, claramente distinguible de los NTC (43/48 pocillos positivos). 

Multiplexing

La reacción multiplex detecta el ARNr 18S marcado con colorante VIC y el gen TGFb con sondas y primers TaqMan etiquetados con FAM. La reacción utilizó la mezcla maestra rápida y se realizó en 96 repeticiones. El eje vertical refleja el cambio en la florescencia normalizado al colorante ROX, y el eje horizontal refleja el aumento de los ciclos de izquierda a derecha. Los valores de CT muestran una separación clara y uniforme de los productos con una baja desviación estándar entre las réplicas.

Genotipado

Estos diagramas demuestran cómo los gráficos mejorados y los gráficos de discriminación alélica en la aplicación de genotipado reflejan con precisión las señales reales frente al ruido de fondo.

HRM

La aplicación del análisis de fusión de alta resolución (HRM) está diseñada para el análisis post-PCR para identificar variaciones en las secuencias de ácido nucleico. El método detecta pequeñas diferencias en las curvas de fusión (disociación) de la PCR que permiten los colorantes de alta luminosidad de unión al ADNbc en combinación con los sistemas QuantStudio. El control preciso de la rampa de temperatura del sistema, las capacidades avanzadas de captura de datos y el software de análisis de HRM lo hacen muy adecuado para el análisis de HRM.

 

 

Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.