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멀티플렉스 IHC를 위한 Aluora Spatial Amplification |
Invitrogen Aluora Spatial Amplification Kit는 멀티플렉스 면역조직화학(mIHC) 응용 분야에서 존재량이 낮은 표적을 검출할 수 있는 강력한 방법을 제공합니다. mIHC, 공간 단백질체(Spatial proteomics)학 및 기타 멀티플렉스 이미징 실험의 한계는 자가형광 및 비특이적 시그널 조건에서 존재량이 낮은 단백질을 검출하는 것입니다. Aluora Spatial Amplification Kit는 강도가 밝은 Aluora dye와 효소 매개 신호 증폭의 원리를 사용하여 한계를 극복할 수 있도록 도와줍니다.
Aluora Spatial Amplification 시약 선택 가이드
| Aluora 430 Spatial Reagent | Aluora 488 Spatial Reagent | Aluora 514 Spatial Reagent | Aluora 555 Spatial Reagent | Aluora 594 Spatial Reagent | Aluora 647 Spatial Reagent | Aluora 700 Spatial Reagent | Aluora 750 Spatial Reagent* | |
| 검출 | 100X의 형광 신호 증폭 | |||||||
| Ex/Em | 427/499 | 493/518 | 512/529 | 553/567 | 589/615 | 652/670 | 687/706 | 757/783 |
| 채널 | 430 | 488 | 514 | 555 | 594 | 647 | 700 | 750 |
| EVOS 필터 | CFP | GFP | YFP | RFP | Texas Red | Cy5 | Cy5.5 | Cy7 |
| 감도 | 탁월함 | |||||||
| 응용분야 | 형광 스펙트럼 및 공간 이미징 응용 분야를 위한 최대 8-plex 멀티플렉스 염색 | |||||||
| 자동화 | Leica Bond와 같은 자동 슬라이드 염색기에서 멀티플렉스 염색과 호환됨 | |||||||
| 개별 Aluora 시약* | AS430HRP | AS488HRP | AS514HRP | AS555HRP | AS594HRP | AS647HRP | AS700HRP | AS750HRP |
| Aluora Goat Anti-Mouse HRP Kit** | A40001329 | A40001330 | A40001331 | A40001332 | A40001333 | A40001334 | A40001335 | A40001336 |
| Aluora Goat anti-rabbit HRP Kits** | A40001337 | A40001338 | A40001339 | A40001340 | A40001341 | A40001342 | A40001343 | A40001344 |
| Aluora Streptavidin HRP Kit** | A40001345 | A40001346 | A40001347 | A40001348 | A40001349 | A40001350 | A40001351 | A40001352 |
| Aluora Spatial Rainbow Kit | A40002450 | |||||||
*Aluora 750 Spatial Reagent는 IR tyramide-유사 시약으로, 한 번의 단계로 조직에 공유 결합 부착됩니다. 이어지는 신호 증폭 반응을 위해 효소 비활성화 및 항체 제거를 즉시 수행할 수 있으므로, 공간 생물학을 위해 시중에 나와 있는 다른 근적외선 신호 증폭 시약에 비해 이점이 있습니다. ** Aluora spatial amplification 키트에는 분석을 수행하는 데 필요한 모든 구성요소가 들어 있습니다. 멀티플렉스 실험은 Aluora 공간 시약을 추가로 구입하여 수행할 수 있습니다. | ||||||||
Spatial biology가이 처음이신가요? 저희가 도와 드리겠습니다. 여기에서 실험 구축에 대한 지원을 받을 수 있습니다.
Aluora Spatial Amplification이란 무엇입니까?
강력한 Aluora dye와 효소 매개 신호 증폭을 결합한 Aluora Spatial Amplification Kit는 멀티플렉스 IHC 및 공간 이미징을 위해 매우 밝고 공유 결합된 fluorophore를 생성합니다. Aluora Spatial Amplification Kit는 형광 신호 강도를 높여 하나의 조직 샘플에서 최대 8개의 타겟을쉽게 시각화할 수 있도록 합니다. 이 기술은 공간 생물학 연구에 매우 유용하며, 이를 통해 공간 관계 및 세포 상호작용을 검출하고 이해할 수 있습니다.
Aluora Spatial Amplification의 기본 프로토콜은 는 일차 항체 라벨링, poly-horseradish peroxidase(HRP) 이차 시약 검출, Aluora dye 반응을 통한 fluorophore 침착, 마지막으로 조직 샘플에 공유 결합 라벨링된 fluorophore를 남기고 항체 복합체를 제거하는 것입니다.
그림 1. Aluora Spatial Amplificationlabeling 워크플로우 관심 표적에 대한 일차 항체를 사용하여 조직을 라벨링한 다음, poly-horseradish peroxidase(HRP) 이차 시약과 함께 인큐베이션합니다. 그런 다음, Aluora dye 반응을 사용하여 fluorophore를 조직에 공유 결합 시킵니다. 그런 다음, 항체 복합체를 제거할 수 있으며, 멀티플렉스 이미징을 위해 프로토콜을 반복할 수 있습니다.
Aluora Spatial Amplification Kit 및 시약의 장점
Invitrogen Aluora dye는 향상된 밝기를 제공하여 감도를 향상시키고 공간 단백질체학 응용 분야에서 탁월한 성능을 제공합니다. 유사한 밝기 및 고유한 방출 스펙트럼의 8가지 서로 다른 fluorophore를 통해, 스펙트럼 이미징 시스템에서 최대 8-plex 멀티플렉싱을 수행할 수 있으므로 포괄적인 Spatial imaging 분석이 가능합니다. 또한, 이러한 fluorophore를 사용하면 효소 매개 신호 증폭으로 인해 낮은 발현량의 타겟을 우수하게 검출할 수 있으며, 일차 항체가 훨씬 적은량 필요합니다. 또한 동일한 종의 일차 항체를 시약과 함께 신호 증폭할 수 있으며 순환적으로 항체를 제거하여 cyclic staining & stripping이 가능하므로 Leica BOND와 같은 자동 슬라이드 염색기에 사용할 수 있으므로, 간소화된 멀티플렉스 염색 워크플로우가 가능합니다.
- 향상된 밝기 — 공간 단백질체학 애플리케이션에 최적화된 더 밝은 fluorophore를 사용하여 향상된 형광 감도를 경험할 수 있으며, 다른 신호 증폭 시스템에 비해 성능이 우수하여 1:1,000 ~ 1:50,000의 일차 항체 희석이 가능합니다.
- 낮은 발현량의 타겟검출 향상 — HRP 효소 매개 Aluora 신호 증폭으로 인해 백그라운드 노이즈 위에서도 매우 적게 존재하는 타겟을 우수하게 검출할 수 있습니다.
- 원활한 기기 호환성 — EVOS S1000 Spatial Imaging System 및 Akoya PhenoImager 상의 형광 스펙트럼 이미징을 위해 특별히 설계되어 공간 이미징 분석 장비와의 원활한 호환성을 보장합니다.
- 멀티플렉싱을 위한 확장된 항체 옵션 — fluorophore의 공유 결합 부착을 통한 효소 매개 라벨링은 신호 증폭 라운드들 사이에서 일차 항체 제거를 가능하게 하고 동일한 숙주 종의 일차 항체를 동시에 사용할 수 있게 하므로 멀티플렉스 라벨링 실험을 위한 항체 옵션을 확장할 수 있습니다.
공간 이미징을 위한 Aluora Spatial Amplification Kit 사용 방법
Aluora 공간 증폭 시약에는 공간 이미징을 위해 특별히 설계된 8개의 형광 염료 세트가 포함되어 있습니다. 이러한 염료는 최대 8-plex 멀티플렉싱을 가능하게 하며 Akoya PhenoImager와 같은 시스템에서의 멀티플렉스 공간 이미징을 위해 스펙트럼 비혼화가 가능한 방출 스펙트럼을 가지고 있습니다. 이를 통해 패널 설계 및 어세이 개발을 간소화할 수 있습니다. 또한, Aluora dye는 표준 필터 세트가 장착된 모든 이미징 시스템에서 사용할 수 있습니다. 그러나 높은 플렉스의 패널의 경우 스펙트럼 중첩을 신중하게 고려해야 합니다.
Aluora Spatial Amplification Kit를 사용한 멀티플렉싱
동일한 숙주 종의 여러 일차 항체를 사용하여 mIHC를 수행할 수 있기 때문에 멀티플렉스 이미징 실험의 새로운 가능성이 열립니다. Aluora 공간 증폭 시약은 낮은 존재량의 타겟에 대해 향상된 감도를 제공할 뿐만 아니라, 항체 교차 반응을 일으키지 않고 조직 샘플에서 동일하거나 다른 숙주 종의 일차 항체에 대해 멀티플렉싱 검출을 가능하게 합니다. Aluora 공간 증폭 기술은 반응성이 높은 티라미드 유사 라디칼을 생성하며, 이는 IHC 샘플에서 공유 결합하고 항체 염색에 국한됩니다. 일차 및 이차 항체는 조직에서 제거할 수 있으며 Aluora dye 신호 발달이 완료된 후 침착된 fluorophore의 강도를 감소시키지 않고 항체를 제거할 수 있습니다. 일단 항체가 제거되면, 조직은 교차반응 위험 없이 동일하거나 다른 숙주 종(토끼나 쥐에서 생성된)의 일차 항체를 사용하여 다시 염색할 수 있으며, 이후 또 다른 라운드의 Aluora 공간 증폭으로 검출할 수 있습니다. 편의성을 높이고 처리량을 높이기 위해, Leica Bond RX 시스템과 같은 자동 슬라이드 염색기에서 이러한 단계를 수행할 수 있습니다.
그림 2. Aluora 공간 증폭을 사용한 순환적 염색 프로세스. 프로토콜은 antigen retrieval로 시작하여 전처리 과정을 통해 비특이적 항원인자의 차단으로 이어집니다. 그런 다음, 조직을 일차 항체로 염색한 후 poly-HRP 이차 시약을 사용할 수 있습니다. 마지막으로, Invitrogen Aluora dye를 추가하면 조직 상에 fluorophore가 공유 결합 하게 됩니다. 항체 복합체가 제거될 1단계부터 시작하여 각 일차 항체에 대해 이 과정을 반복할 수 있습니다.
Aluora spatial amplification kit의 의 데이터 이미지 갤러리
그림 3. Aluora Spatial Rainbow Kit 및 DAPI로 염색한 침윤성 관암종 조직. Aluora Spatial Rainbow Kit (카탈로그 번호 A40002450)로 처리되고 염색된 인간 침윤성 관암종 유방 조직 확대된 이미지가 삽입된 복합 이미지. EVOS S1000 Spatial Imaging System에서 이미지와 스펙트럼 비혼화(Spectral unmixing)를 수행하였습니다.
그림 4. 개별 타일에 나타낸 8-plex Aluora spatial amplification 어세이로 염색한 침윤성 관암종 조직. Aluora Spatial Rainbow Kit (카탈로그 번호 A40002450)로 처리하고 염색한 인간 침윤성 관암종 유방 조직. 타일은 개별 Aluora dye 색상을 나타냅니다. EVOS S1000 Spatial Imaging System에서 이미지와 스펙트럼 비혼화(Spectral unmixing)를 수행하였습니다.
그림 5. 단일 세포 분할 및 표현형분석으로 면역 세포 하위집단의 공간 분포를 보여줍니다. 단일 세포 표적 발현과 면역 세포 하위집단의 특이적 국소화를 확인하기 위해 분석된 인간 침윤성 관암종 유방 조직. (A)Aluora Spatial Rainbow Kit (카탈로그 번호 A40002450)를 사용한 복합 이미지. (B) 비멘틴(vimentin) 양성 및 음성 영역을 식별하는 조직 분할. (C) 이중 양성 증식 & 면역 세포 표현형을 나타내는 흰색 세포 구획과 함께 10,454 세포를 함유하는 0.7 mm2 영역 분석. (D) 영역-특이적 세포 국소화 식별. Indica Labs HALO (버전 4.0.5107.318) 소프트웨어에서 멀티플렉스 면역형광 스티치 이미지 분석을 수행했습니다.
그림 6. 8-plex Aluora Spatial Amplification Assay와 DAPI를 사용하여 염색한 침윤성 관암종 조직. Aluora 공간 증폭 8-plex 어세이로 처리하고 염색한 인간 침윤성 관암종 유방 조직. 왼쪽은 복합 이미지를 나타나고 오른쪽은 개별 비혼화된 채널을 나타냅니다. EVOS S1000 Spatial Imaging System에서 이미지와 스펙트럼 비혼화를 수행하였습니다.
그림 7. Aluora 594 Spatial Dye는 경쟁사 O 및 더 낮은 일차 항체 농도를 사용하는 이차 항체 동등체와 비교하여 우수한 신호를 나타내었습니다. 인간 FFPE 소장 샘플을 1:10,000의 PCNA Monoclonal Antibody (PC10) (카탈로그 번호 13-3900)와 함께 인큐베이션한 다음 Alexa Fluor 594 Secondary Antibody (카탈로그 번호 A-11014), Aluora 594 Goat Anti-Mouse HRP Kit (카탈로그 번호 A40001331) 또는 경쟁사 1의 fluorophore 동등체로 라벨링하였습니다. N=신호 대 백그라운드를 위해 분석된 이미지 5개, P < 0.0001. Invitrogen EVOS S1000 Spatial Imaging System으로 이미지를 캡처하였습니다.
그림 8. 인간 FFPE 소장에서 Aluora 공간 증폭 시약. 인간 FFPE 소장을 Mouse PCNA 항체 (PC10, 카탈로그 번호 13-3900)와 함께 인큐베이션 하고 녹색으로 보이는 Aluora 430 Goat Anti-Mouse HRP Kit (카탈로그 번호 A40001329), Mouse Vimentin antibody (V9, 카탈로그 번호 MA5-11883)로 라벨링하고, 적색으로 보이는 Aluora 594 Goat Anti-Mouse HRP Kit (카탈로그 번호 A40001333) 및 Mouse SMA antibody (1A4, 카탈로그 번호 14-9760-82)로 라벨링하고, 백색으로 보이는 Aluora 700 Goat Anti-Mouse HRP Kit (카탈로그 번호 A40001336) 및 DAPI 핵 염색제로 라벨링하였습니다. 슬라이드는 Prolong Glass Antifade Mountant를 사용하여 봉입하였습니다. Invitrogen EVOS M7000 Imaging System으로 이미지를 캡처하였습니다(EVOS Imaging System에 대한 정보 보기).
그림 9. 인간 FFPE 소장에서 Aluora 공간 증폭 시약. 인간 FFPE 소장을 Mouse PCNA antibody (PC10, 카탈로그 번호 13-3900)과 함께 인큐베이션하였고 적색으로 보이는 Aluora 647 Goat anti-Mouse HRP Kit (카탈로그 번호 A40001334), Mouse Vimentin antibody (V9, 카탈로그 번호 MA5-11883)으로 라벨링하였고 녹색으로 보이는 Aluora 488 Goat anti-Mouse HRP Kit (A40001330) 및 Mouse SMA antibody (1A4, 카탈로그 번호 14-9760-82)를 사용하여 검출하고 백색으로 보이는 Aluora 700 Goat anti-Mouse HRP Kit (카탈로그 번호 A40001336) 및 DAPI 핵 염색제를 사용하여 검출하였습니다. 슬라이드는 Prolong Glass Antifade Mountant를 사용하여 봉입하였습니다. Invitrogen EVOS M7000 Imaging System으로 이미지를 캡처하였습니다(EVOS Imaging System에 대한 정보 보기).
Aluora Spatial Amplification 시약 선택 가이드
| Aluora 430 Spatial Reagent | Aluora 488 Spatial Reagent | Aluora 514 Spatial Reagent | Aluora 555 Spatial Reagent | Aluora 594 Spatial Reagent | Aluora 647 Spatial Reagent | Aluora 700 Spatial Reagent | Aluora 750 Spatial Reagent* | |
| 검출 | 100X의 형광 신호 증폭 | |||||||
| Ex/Em | 427/499 | 493/518 | 512/529 | 553/567 | 589/615 | 652/670 | 687/706 | 757/783 |
| 채널 | 430 | 488 | 514 | 555 | 594 | 647 | 700 | 750 |
| EVOS 필터 | CFP | GFP | YFP | RFP | Texas Red | Cy5 | Cy5.5 | Cy7 |
| 감도 | 탁월함 | |||||||
| 응용분야 | 형광 스펙트럼 및 공간 이미징 응용 분야를 위한 최대 8-plex 멀티플렉스 염색 | |||||||
| 자동화 | Leica Bond와 같은 자동 슬라이드 염색기에서 멀티플렉스 염색과 호환됨 | |||||||
| 개별 Aluora 시약* | AS430HRP | AS488HRP | AS514HRP | AS555HRP | AS594HRP | AS647HRP | AS700HRP | AS750HRP |
| Aluora Goat Anti-Mouse HRP Kit** | A40001329 | A40001330 | A40001331 | A40001332 | A40001333 | A40001334 | A40001335 | A40001336 |
| Aluora Goat anti-rabbit HRP Kits** | A40001337 | A40001338 | A40001339 | A40001340 | A40001341 | A40001342 | A40001343 | A40001344 |
| Aluora Streptavidin HRP Kit** | A40001345 | A40001346 | A40001347 | A40001348 | A40001349 | A40001350 | A40001351 | A40001352 |
| Aluora Spatial Rainbow Kit | A40002450 | |||||||
*Aluora 750 Spatial Reagent는 IR tyramide-유사 시약으로, 한 번의 단계로 조직에 공유 결합 부착됩니다. 이어지는 신호 증폭 반응을 위해 효소 비활성화 및 항체 제거를 즉시 수행할 수 있으므로, 공간 생물학을 위해 시중에 나와 있는 다른 근적외선 신호 증폭 시약에 비해 이점이 있습니다. ** Aluora spatial amplification 키트에는 분석을 수행하는 데 필요한 모든 구성요소가 들어 있습니다. 멀티플렉스 실험은 Aluora 공간 시약을 추가로 구입하여 수행할 수 있습니다. | ||||||||
Spatial biology가이 처음이신가요? 저희가 도와 드리겠습니다. 여기에서 실험 구축에 대한 지원을 받을 수 있습니다.
Aluora Spatial Amplification이란 무엇입니까?
강력한 Aluora dye와 효소 매개 신호 증폭을 결합한 Aluora Spatial Amplification Kit는 멀티플렉스 IHC 및 공간 이미징을 위해 매우 밝고 공유 결합된 fluorophore를 생성합니다. Aluora Spatial Amplification Kit는 형광 신호 강도를 높여 하나의 조직 샘플에서 최대 8개의 타겟을쉽게 시각화할 수 있도록 합니다. 이 기술은 공간 생물학 연구에 매우 유용하며, 이를 통해 공간 관계 및 세포 상호작용을 검출하고 이해할 수 있습니다.
Aluora Spatial Amplification의 기본 프로토콜은 는 일차 항체 라벨링, poly-horseradish peroxidase(HRP) 이차 시약 검출, Aluora dye 반응을 통한 fluorophore 침착, 마지막으로 조직 샘플에 공유 결합 라벨링된 fluorophore를 남기고 항체 복합체를 제거하는 것입니다.
그림 1. Aluora Spatial Amplificationlabeling 워크플로우 관심 표적에 대한 일차 항체를 사용하여 조직을 라벨링한 다음, poly-horseradish peroxidase(HRP) 이차 시약과 함께 인큐베이션합니다. 그런 다음, Aluora dye 반응을 사용하여 fluorophore를 조직에 공유 결합 시킵니다. 그런 다음, 항체 복합체를 제거할 수 있으며, 멀티플렉스 이미징을 위해 프로토콜을 반복할 수 있습니다.
Aluora Spatial Amplification Kit 및 시약의 장점
Invitrogen Aluora dye는 향상된 밝기를 제공하여 감도를 향상시키고 공간 단백질체학 응용 분야에서 탁월한 성능을 제공합니다. 유사한 밝기 및 고유한 방출 스펙트럼의 8가지 서로 다른 fluorophore를 통해, 스펙트럼 이미징 시스템에서 최대 8-plex 멀티플렉싱을 수행할 수 있으므로 포괄적인 Spatial imaging 분석이 가능합니다. 또한, 이러한 fluorophore를 사용하면 효소 매개 신호 증폭으로 인해 낮은 발현량의 타겟을 우수하게 검출할 수 있으며, 일차 항체가 훨씬 적은량 필요합니다. 또한 동일한 종의 일차 항체를 시약과 함께 신호 증폭할 수 있으며 순환적으로 항체를 제거하여 cyclic staining & stripping이 가능하므로 Leica BOND와 같은 자동 슬라이드 염색기에 사용할 수 있으므로, 간소화된 멀티플렉스 염색 워크플로우가 가능합니다.
- 향상된 밝기 — 공간 단백질체학 애플리케이션에 최적화된 더 밝은 fluorophore를 사용하여 향상된 형광 감도를 경험할 수 있으며, 다른 신호 증폭 시스템에 비해 성능이 우수하여 1:1,000 ~ 1:50,000의 일차 항체 희석이 가능합니다.
- 낮은 발현량의 타겟검출 향상 — HRP 효소 매개 Aluora 신호 증폭으로 인해 백그라운드 노이즈 위에서도 매우 적게 존재하는 타겟을 우수하게 검출할 수 있습니다.
- 원활한 기기 호환성 — EVOS S1000 Spatial Imaging System 및 Akoya PhenoImager 상의 형광 스펙트럼 이미징을 위해 특별히 설계되어 공간 이미징 분석 장비와의 원활한 호환성을 보장합니다.
- 멀티플렉싱을 위한 확장된 항체 옵션 — fluorophore의 공유 결합 부착을 통한 효소 매개 라벨링은 신호 증폭 라운드들 사이에서 일차 항체 제거를 가능하게 하고 동일한 숙주 종의 일차 항체를 동시에 사용할 수 있게 하므로 멀티플렉스 라벨링 실험을 위한 항체 옵션을 확장할 수 있습니다.
공간 이미징을 위한 Aluora Spatial Amplification Kit 사용 방법
Aluora 공간 증폭 시약에는 공간 이미징을 위해 특별히 설계된 8개의 형광 염료 세트가 포함되어 있습니다. 이러한 염료는 최대 8-plex 멀티플렉싱을 가능하게 하며 Akoya PhenoImager와 같은 시스템에서의 멀티플렉스 공간 이미징을 위해 스펙트럼 비혼화가 가능한 방출 스펙트럼을 가지고 있습니다. 이를 통해 패널 설계 및 어세이 개발을 간소화할 수 있습니다. 또한, Aluora dye는 표준 필터 세트가 장착된 모든 이미징 시스템에서 사용할 수 있습니다. 그러나 높은 플렉스의 패널의 경우 스펙트럼 중첩을 신중하게 고려해야 합니다.
Aluora Spatial Amplification Kit를 사용한 멀티플렉싱
동일한 숙주 종의 여러 일차 항체를 사용하여 mIHC를 수행할 수 있기 때문에 멀티플렉스 이미징 실험의 새로운 가능성이 열립니다. Aluora 공간 증폭 시약은 낮은 존재량의 타겟에 대해 향상된 감도를 제공할 뿐만 아니라, 항체 교차 반응을 일으키지 않고 조직 샘플에서 동일하거나 다른 숙주 종의 일차 항체에 대해 멀티플렉싱 검출을 가능하게 합니다. Aluora 공간 증폭 기술은 반응성이 높은 티라미드 유사 라디칼을 생성하며, 이는 IHC 샘플에서 공유 결합하고 항체 염색에 국한됩니다. 일차 및 이차 항체는 조직에서 제거할 수 있으며 Aluora dye 신호 발달이 완료된 후 침착된 fluorophore의 강도를 감소시키지 않고 항체를 제거할 수 있습니다. 일단 항체가 제거되면, 조직은 교차반응 위험 없이 동일하거나 다른 숙주 종(토끼나 쥐에서 생성된)의 일차 항체를 사용하여 다시 염색할 수 있으며, 이후 또 다른 라운드의 Aluora 공간 증폭으로 검출할 수 있습니다. 편의성을 높이고 처리량을 높이기 위해, Leica Bond RX 시스템과 같은 자동 슬라이드 염색기에서 이러한 단계를 수행할 수 있습니다.
그림 2. Aluora 공간 증폭을 사용한 순환적 염색 프로세스. 프로토콜은 antigen retrieval로 시작하여 전처리 과정을 통해 비특이적 항원인자의 차단으로 이어집니다. 그런 다음, 조직을 일차 항체로 염색한 후 poly-HRP 이차 시약을 사용할 수 있습니다. 마지막으로, Invitrogen Aluora dye를 추가하면 조직 상에 fluorophore가 공유 결합 하게 됩니다. 항체 복합체가 제거될 1단계부터 시작하여 각 일차 항체에 대해 이 과정을 반복할 수 있습니다.
Aluora spatial amplification kit의 의 데이터 이미지 갤러리
그림 3. Aluora Spatial Rainbow Kit 및 DAPI로 염색한 침윤성 관암종 조직. Aluora Spatial Rainbow Kit (카탈로그 번호 A40002450)로 처리되고 염색된 인간 침윤성 관암종 유방 조직 확대된 이미지가 삽입된 복합 이미지. EVOS S1000 Spatial Imaging System에서 이미지와 스펙트럼 비혼화(Spectral unmixing)를 수행하였습니다.
그림 4. 개별 타일에 나타낸 8-plex Aluora spatial amplification 어세이로 염색한 침윤성 관암종 조직. Aluora Spatial Rainbow Kit (카탈로그 번호 A40002450)로 처리하고 염색한 인간 침윤성 관암종 유방 조직. 타일은 개별 Aluora dye 색상을 나타냅니다. EVOS S1000 Spatial Imaging System에서 이미지와 스펙트럼 비혼화(Spectral unmixing)를 수행하였습니다.
그림 5. 단일 세포 분할 및 표현형분석으로 면역 세포 하위집단의 공간 분포를 보여줍니다. 단일 세포 표적 발현과 면역 세포 하위집단의 특이적 국소화를 확인하기 위해 분석된 인간 침윤성 관암종 유방 조직. (A)Aluora Spatial Rainbow Kit (카탈로그 번호 A40002450)를 사용한 복합 이미지. (B) 비멘틴(vimentin) 양성 및 음성 영역을 식별하는 조직 분할. (C) 이중 양성 증식 & 면역 세포 표현형을 나타내는 흰색 세포 구획과 함께 10,454 세포를 함유하는 0.7 mm2 영역 분석. (D) 영역-특이적 세포 국소화 식별. Indica Labs HALO (버전 4.0.5107.318) 소프트웨어에서 멀티플렉스 면역형광 스티치 이미지 분석을 수행했습니다.
그림 6. 8-plex Aluora Spatial Amplification Assay와 DAPI를 사용하여 염색한 침윤성 관암종 조직. Aluora 공간 증폭 8-plex 어세이로 처리하고 염색한 인간 침윤성 관암종 유방 조직. 왼쪽은 복합 이미지를 나타나고 오른쪽은 개별 비혼화된 채널을 나타냅니다. EVOS S1000 Spatial Imaging System에서 이미지와 스펙트럼 비혼화를 수행하였습니다.
그림 7. Aluora 594 Spatial Dye는 경쟁사 O 및 더 낮은 일차 항체 농도를 사용하는 이차 항체 동등체와 비교하여 우수한 신호를 나타내었습니다. 인간 FFPE 소장 샘플을 1:10,000의 PCNA Monoclonal Antibody (PC10) (카탈로그 번호 13-3900)와 함께 인큐베이션한 다음 Alexa Fluor 594 Secondary Antibody (카탈로그 번호 A-11014), Aluora 594 Goat Anti-Mouse HRP Kit (카탈로그 번호 A40001331) 또는 경쟁사 1의 fluorophore 동등체로 라벨링하였습니다. N=신호 대 백그라운드를 위해 분석된 이미지 5개, P < 0.0001. Invitrogen EVOS S1000 Spatial Imaging System으로 이미지를 캡처하였습니다.
그림 8. 인간 FFPE 소장에서 Aluora 공간 증폭 시약. 인간 FFPE 소장을 Mouse PCNA 항체 (PC10, 카탈로그 번호 13-3900)와 함께 인큐베이션 하고 녹색으로 보이는 Aluora 430 Goat Anti-Mouse HRP Kit (카탈로그 번호 A40001329), Mouse Vimentin antibody (V9, 카탈로그 번호 MA5-11883)로 라벨링하고, 적색으로 보이는 Aluora 594 Goat Anti-Mouse HRP Kit (카탈로그 번호 A40001333) 및 Mouse SMA antibody (1A4, 카탈로그 번호 14-9760-82)로 라벨링하고, 백색으로 보이는 Aluora 700 Goat Anti-Mouse HRP Kit (카탈로그 번호 A40001336) 및 DAPI 핵 염색제로 라벨링하였습니다. 슬라이드는 Prolong Glass Antifade Mountant를 사용하여 봉입하였습니다. Invitrogen EVOS M7000 Imaging System으로 이미지를 캡처하였습니다(EVOS Imaging System에 대한 정보 보기).
그림 9. 인간 FFPE 소장에서 Aluora 공간 증폭 시약. 인간 FFPE 소장을 Mouse PCNA antibody (PC10, 카탈로그 번호 13-3900)과 함께 인큐베이션하였고 적색으로 보이는 Aluora 647 Goat anti-Mouse HRP Kit (카탈로그 번호 A40001334), Mouse Vimentin antibody (V9, 카탈로그 번호 MA5-11883)으로 라벨링하였고 녹색으로 보이는 Aluora 488 Goat anti-Mouse HRP Kit (A40001330) 및 Mouse SMA antibody (1A4, 카탈로그 번호 14-9760-82)를 사용하여 검출하고 백색으로 보이는 Aluora 700 Goat anti-Mouse HRP Kit (카탈로그 번호 A40001336) 및 DAPI 핵 염색제를 사용하여 검출하였습니다. 슬라이드는 Prolong Glass Antifade Mountant를 사용하여 봉입하였습니다. Invitrogen EVOS M7000 Imaging System으로 이미지를 캡처하였습니다(EVOS Imaging System에 대한 정보 보기).
주문 정보
웨비나: High-plex 공간 단백질체학 워크플로우
효소 활성 공간 증폭 시약을 활용하는 공간 단백질 워크플로우의 발전으로 암 연구 기능에 혁신을 가져왔습니다. 이 웨비나에서는 조직 내 최대 8개의 바이오마커를 동시에 검출할 수 있는 기술에 대한 설명을 제공하며, 유방암 검체의 다차원 분석을 가능하게 하고 종양 미세환경 내 복잡한 세포 상호 작용 및 표현형에 대한 귀중한 통찰력을 제공합니다.
리소스
PhenoImager는 Akoya Biosciences의 상표입니다. BOND는 Leica Biosystems 및 그 계열사의 상표입니다.
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.
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