El PureLink™ Pro 96 Viral RNA⁄DNA Purification Kit es un sistema de placas de sílice de 96 pocillos que puede extraer tanto ARN como ADN víricos a partir de 200 µl de líquidos extracelulares que utilizan un cestillo para centrífuga de 96 pocillos de baja profundidad para facilidad de uso, sin que haya pérdidas en la sensibilidad. Estos kits proporcionan:
• Kit Versatility-One para todas sus muestras, el protocolo está optimizado para la extracción de ARN y ADN viral
• Flexibilidad en la elección de las velocidades mínimas de centrífugación para el procesamiento de 96 pocillos de 2250 x g y la profundidad del cestillo de un rotor de 5 cm hacen este kit uno de los sistemas más adaptables para las centrífugas de laboratorio existentes (figura 1)
• Sensibilidad y reproducibilidad tan buenas como una columna de centrifugación: el movimiento de alto rendimiento es fiable y sencillo, sin pérdida de precisión en la cuantificación

El kit de purificación de ADN⁄ARN víricos PureLink™ Pro 96 se basa en la química de extracción de placas de sílice convencional. Las muestras libres de células se lisan en tampones con guanidina que se han reformulado para aumentar la recuperación y sensibilidad de los ácidos nucleicos purificados, mientras que el ARN portador se utiliza para proteger las muestras de la degradación de la ARNasa. La unión de lisados a la placa de filtro vírico se puede realizar con un colector de vacío o centrifugación usando un rotor de 96 pocillos con cubos de una profundidad de solo 5 cm. Después de lavarse con tampones a base de etanol, el ARN o ADN vírico se eluye en 100 µl de agua sin ARNasa. El ARN o ADN está listo para usarse en RT-PCR de uno o dos pasos y en qRT-PCR, qPCR u otros procedimientos de amplificación enzimática.

El kit de purificación de ADN⁄ARN víricos PureLink™ Pro 96 muestra una uniformidad excelente entre pocillos
Un requisito fundamental para cualquier sistema de purificación de 96 pocillos es la uniformidad entre pocillos. Cuando se utiliza una técnica tan sensible como la qRT-PCR para la detección de ácidos nucleicos virales, que puede existir como títulos virales bajos de muestras de pacientes, la uniformidad entre las muestras se vuelve aún más importante. Cuando se analizó la recuperación entre pocillos de ARN lentivírico mediante el PureLink™ Pro 96 Viral RNA⁄DNA Purification Kit, se obtuvieron valores de Ct consistentes en los análisis de qRT-PCR, mientras que los controles plasmáticos realizados en la misma placa fueron negativos, lo cual demuestra la inexistencia de contaminación cruzada (figura 2).

Obtenga los mismos resultados en una extracción de 96 placas que con una columna de centrifugado
Para demostrar la consistencia de nuestra novedosa química de purificación en los formatos de alto y bajo contenido, el virus Armored RNA™ VHC se enriqueció con plasma humano y 200 µl se usaron para la purificación de ácido nucleico vírico con el PureLink™ Viral RNA⁄DNA Mini Kit (purificación basada en columna de centrifugación) o con el PureLink™ Pro 96 Viral RNA⁄DNA Purification Kit. Las muestras purificadas se analizaron para comparar el rendimiento utilizando qRT-PCR. Ambos métodos de purificación pusieron de manifiesto con éxito la purificación y detección de virus, ya que ambos perfiles de purificación mostraron perfiles de análisis de detección de qRT-PCR escalables (figura 3). El kit de purificación de ADN/ARN víricos PureLink™ Pro 96 proporciona una purificación sensible de ARN/ADN viral escalable y lineal con una sensibilidad y eficiencia iguales a la del formato de purificación de columnas de centrifugación.

Diseño mejorado de la placa
El kit de purificación de ADN/ARN víricos PureLink™ Pro proporciona placas de 96 pocillos (figura 4) con semifaldón optimizadas para mejorar el rendimiento y los resultados. Además, las boquillas de la placa con cuello anular evitan la contaminación cruzada de las muestras y mejoran el secado de la membrana de sílice para evitar el arrastre de etanol. Asimismo, el procesamiento de muestras se puede realizar manualmente con un colector de vacío de sobremesa, mediante la centrifugación (a 2250 × g) o con una plataforma de manipulación automatizada de líquidos. El diseño de la placa con semifaldón es compatible con la mayoría de los distribuidores de vacío en las estaciones de trabajo robóticas.