EZ-Link™ Hydrazide-PEG4-Biotin

Thermo Scientific EZ-Link Hydrazid-PEG4-Biotin (auch Biotin-PEG4-Hydrazid genannt) ist ein aldehyd-reaktives Biotinylierungsreagenz, das einen PEG-Spacerarm mit 4 Einheiten (Polyethylenglycol) für erhöhte Hydrophilität enthält.

Merkmale von EZ-Link Hydrazid-PEG4-Biotin:

• Glykoproteinmarkierung—Biotinyliert glykosylierte Proteine an Sialsäure-Rückständen für den Nachweis oder die Reinigung mit Streptavidin-Sonden oder Harzen
• Zelloberflächenmarkierunge—Biotinyliert und isoliert Zelloberflächenglykoproteine; Reagenz durchdringt keine Membranen ganzer Zellen
• Aldehyd-reaktiv—wirkt mit Aldehyden, die durch Periodat-Oxidation von Zuckergruppen gebildet werden
• Hydrazid-aktiviert—Reaktionen bei einem pH-Wert von 4 bis 6 in Puffern wie Natriumacetat
• PEGyliert – Spacerarm enthält eine hydrophile, Polyethylenglycol-(PEG)-Gruppe mit 4 Einheiten
• Verbessert die Löslichkeit – PEGylation beeinträchtigt die Wasserlöslichkeit des biotinylierten Moleküls und verhindert so die Aggregation von biotinylierten Antikörpern, die in der Lösung gespeichert sind.
• Irreversibel—Bildet halbdauerhafte Hydrazonenbindungen; Spacearm kann nicht gespalten werden
• Löslichkeit—wird in der Regel in DMSO aufgelöst, um konzentrierte Stammlösung zu erhalten
• Lange Reichweite—Spacerarm (Gesamtlänge zum Ziel hinzugefügt) ist 31,3 Angström

Biotin-PEG4-Hydrazid ermöglicht die Biotinylierung von Glykoproteinen und anderen Molekülen, die Aldehyde oder oxidierbare Zuckergruppen enthalten. Die Hydrazid-Gruppe reagiert spontan mit Aldehyd- oder Ketongruppen, um eine stabile Hydrazinbindung zu bilden. Aldehyd-Gruppen können durch schonende Periodat-Oxidation von cis-Diolen in Sialsäure und anderen Zuckern in Kohlenhydraten gebildet werden. Der hydrophile Polyethylenglykol (PEG)-Spacerarm mit 4 Einheiten verleiht Wasserlöslichkeit, die auf das biotinylierte Molekül übertragen wird, wodurch die Aggregation markierter Proteine, die in Lösung gelagert sind, reduziert wird. Das PEG-Segment erhöht außerdem die Länge und Flexibilität des Spacerarms und minimiert so die sterische Behinderung, die bei der Bindung an Avidin-Moleküle auftritt.

Wir stellen Biotin Reagenzien her, um die höchstmögliche Gesamtproduktintegrität, -konsistenz und -leistung für die vorgesehenen Forschungsanwendungen zu gewährleisten.

Biotinylierungsreagenzien unterscheiden sich in Reaktivität, Länge, Löslichkeit, Zelldurchlässigkeit und Spaltbarkeit. Hydrazide und Alkoxyamine sind zwei Arten von Carbonyl-reaktiven Gruppen. Hydrazide (—NH-NH2) reagieren, unter leicht sauren Bedingungen, spezifisch mit Aldehydgruppen zu Hydrazonverbindungen; diese können mit Natriumcyanoborhydrid (Artikelnr. 44892) weiter zu stabilen sekundären Aminbindungen reduziert werden. Die Reaktion ist in Anwesenheit von Anilin (Artikelnr. 88944) effizienter. Alternativ können Hydrazide mit Hilfe der EDC-Carbodiimid-Chemiean Carbonsäuren konjugiert werden.

Reaktive Aldehydgruppen können in Glykoproteinen und anderen Polysaccharid-Verbindungen durch Oxidation von konstituierenden Zuckerdiolen mit Natriumperiodid (Art.Nr. 20504)erzeugt werden. Sialinsäurereste sind häufige Bestandteile der Proteinglykosylierung und lassen sich mit 1 mM NaIO4 leicht in Aldehyde umwandeln.