Imject™ Blue Carrier™ Protein

La proteína Blue Carrier Imject es una hemocianina derivada de moluscos altamente soluble que permite la preparación sencilla de inmunógenos eficaces con antígenos peptídicos que contienen grupos amino o carboxilo.

Características de la proteína Blue Carrier Imject:

• Conjugación de alto rendimiento: cada molécula de CCH contiene cientos de aminas primarias disponibles para la unión a haptenos mediante entrecruzadores EDC o ésteres NHS.
• Calidad validada: la proteína portadora inmunogénica se ha purificado especialmente para asegurar una estructura química uniforme y solubilidad con el fin de lograr un rendimiento homogéneo.
• Mayor solubilidad: su mayor solubilidad en comparación con KLH permite usar la proteína Blue Carrier en un abanico más amplio de protocolos de conjugación para adaptarse a haptenos menos frecuentes o de peor solubilidad.
• Altamente inmunogénica: ofrece básicamente el mismo nivel de inmunogenicidad y distancia filogenética que la hemocianina de lapa californiana (KLH).

La proteína Blue Carrier es un preparado purificado de hemocianina de Concholepas concholepas (CCH) que confiere alta inmunogenicidad a antígenos conjugados para inyección e inmunización en procedimientos de producción de anticuerpos. Esta proteína de gran tamaño muestra, en gran medida, las mismas propiedades inmunogénicas que la conocida proteína portadora hemocianina de lapa californiana (KLH). Sin embargo, su mayor solubilidad proporciona más flexibilidad en los protocolos de preparación de inmunógenos, lo que posibilita un intervalo más amplio de condiciones de pH y tampón para la conjugación de péptidos, proteínas y otros haptenos mediante entrecruzadores clásicos como glutaraldehído, Sulfo-SMCC y EDC. El kit de centrifugación de proteína Blue Carrier con EDC Thermo Scientific Imject facilita la preparación de inmunógenos.

Propiedades de la proteína Blue Carrier:

• Nombres alternativos: hemocianina de Concholepas concholepas, CCH
• Peso molecular: molécula completa: ∼8 000 000; subunidades: ∼400 000 y ∼350 000
• Absorción: máxima a 280 nm, 350 nm y 558 nm
• Coeficiente de extinción (una solución de 1 mg/ml): 1,4 a 280 nm; 0,35 a 346 nm
• Relación A280/A350: ∼4,0
• Relación cobre/proteína: ∼16 Cu²⁺ por molécula de proteína
• Punto isoeléctrico: 6,0
• Solubilidad: soluble en tampones acuosos: pH 7,0 a 8,0
• Estabilidad: estable en tampones acuosos: ∼pH 7,2 sin Ca²⁺ ni Mg²⁺

Las proteínas portadoras son moléculas grandes y complejas capaces de estimular una respuesta inmunitaria tras su inyección. La producción satisfactoria de anticuerpos específicos frente a antígenos pequeños (es decir, péptidos o compuestos farmacológicos) requiere que estos haptenos se conjuguen covalentemente con una molécula más grande y más compleja (normalmente una proteína) para hacerlos inmunogénicos. Las proteínas portadoras se seleccionan en función de su inmunogenicidad, su solubilidad y de si se puede logar un nivel adecuado de conjugación hapteno-proteína portadora.

La proteína Blue Carrier es una hemocianina especialmente purificada que se extrae del molusco Concholepas concholepas. La proteína CCH está compuesta por dos subunidades polipeptídicas muy grandes (404/351 kDa) que forman una estructura heterodidecamérica muy estable, incluso en ausencia de cationes bivalentes. (En contraposición, KLH tiene una estructura homodidecamérica menos estable y soluble). La compleja disposición molecular de las subunidades de CCH contiene diversas estructuras antigénicas repetidas que provocan una fuerte reacción inmunitaria mediada por linfocitos T y B.

Debido a su gran tamaño y complejidad molecular, las hemocianinas KLH y CCH son las proteínas preferidas como inmunógenos para producir anticuerpos contra haptenos y péptidos. Además, algunos estudios sugieren que la fuerte respuesta inmunitaria de hipersensibilidad de tipo retardado (DTH) provocada por las hemocianinas en animales y humanos tiene efectos terapéuticos beneficiosos en ciertos tipos de cáncer. Los nuevos avances en la inmunoterapia contra el cáncer han aprovechado las propiedades inmunogénicas únicas de las hemocianinas en el desarrollo de nuevas vacunas conjugadas para el tratamiento de enfermedades emergentes.

El entrecruzador de carbodiimida EDC conjuga haptenos que contienen grupos carboxilo (por ejemplo, el extremo C de los antígenos peptídicos) con la proteína portadora BSA. Este método de preparación de inmunógenos es idóneo para antígenos peptídicos con pocos o ningún resto de ácido aspártico y glutámico (carboxilatos) y de restos de lisina (aminas primarias) en la parte central de la secuencia primaria. Dado que los péptidos contienen tanto carboxilatos como aminas, la conjugación mediante EDC tiene como resultado su polimerización en distinto grado y una orientación aleatoria en su adhesión a la proteína portadora. Normalmente, esto da lugar a un alto nivel de carga antigénica en la proteína portadora, así como la presentación en todas las orientaciones posibles para la producción de anticuerpos. No obstante, los epítopos importantes (los que se desea detectar) de la secuencia peptídica del antígeno pueden bloquearse mediante la conjugación mediada por EDC si esas regiones contienen aminas primarias (restos de lisina) o carboxilatos (restos de ácido aspártico y glutámico). En estos casos, utilice un entrecruzador reactivo de aminas hobiofuncional con la Blue Carrier purificada del tampón de fosfato o sintetice el péptido con una cisteína terminal exclusiva, y utilice un kit con Blue Carrier activada con maleimida para preparar el conjugado de proteína portadora.

Más datos del producto
• Datos de activación y conjugación de proteínas del portador para la preparación del inmunógeno

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