Imject™ Blue Carrier™ Protein

Imject Blue Carrier Protein ist ein hoch lösliches Hämocyanin aus Weichtieren, das eine einfache Vorbereitung wirksamer Immunogene mit Amin- oder Carboxyl-Peptid-Antigenen ermöglicht.

Merkmale von Imject Blue Carrier Protein:

• Konjugation mit hoher Ausbeute – jedes CCH-Molekül enthält Hunderte primärer Amine, die für die Kopplung von Hapten über EDC- oder NHS-Ester-Crosslinker verfügbar sind
• Validierte Qualität – das immunogene Trägerprotein wird speziell gereinigt, um eine einheitliche chemische Struktur und Löslichkeit für eine konsistente Leistung zu gewährleisten
• Überlegene Löslichkeit – eine höhere Löslichkeit im Vergleich zu KLH ermöglicht die Verwendung von Blue Carrier Protein in einem breiteren Spektrum von Konjugationsprotokollen, um ungewöhnliche oder schlecht lösliche Hapten aufzunehmen
• Hoch immunogen – bietet im Wesentlichen die gleiche Immunogenität und den gleichen phylogenetischen Abstand wie Keyhole-Limpet-Hämocyanin (KLH)

Blue Carrier Protein ist ein aufgereinigtes Hämocyanin aus Concholepas concholepas (CCH), das konjugierten Antigenen für die Injektion und Immunisierung bei Antikörperproduktionsverfahren hohe Immunogenität verleiht. Das große Protein besitzt die meisten immunogenen Eigenschaften des beliebten Trägerproteins Keyhole-Limpet-Haemocyanin (KLH). Dank seiner deutlich besseren Löslichkeit sorgt das Blue Carrier Protein jedoch für eine größere Flexibilität bei Protokollen zur Immunogenzubereitung, da es für die Verknüpfung mit Peptiden, Proteinen und anderen Haptenen mit klassischen Crosslinkern wie Glutaraldehyd, Sulfo-SMCC und EDC eine breitere Auswahl an Puffern und pH-Bedingungen erlaubt. Das mitgelieferte Thermo Scientific Imject EDC Blue Carrier Spin Kit ermöglicht eine einfache Herstellung von Immunogenen.

Eigenschaften von Blue Carrier Protein:

• Alternative Benennung: Concholepas concholepas Hämocyanin, CCH
• Molekulargewicht: Vollständiges Molekül: ∼ 8.000.000; Untereinheiten: ∼ 400.000 und ∼350.000
• Absorption: Maxima 280 nm, 350 nm und 558 nm
• Extinktionskoeffizient (A 1 mg/ml Lösung): 1,4 bei 280 nm; 0,35 bei 346 nm
• A280/A350-Verhältnis: ∼ 4,0
• Kupfer/Protein-Verhältnis: ∼ 16 Cu²⁺ pro Proteinmolekül
• Isoelektrischer Punkt: 6,0
• Löslichkeit: Löslich in wässrigen Puffern: pH 7,0 bis 8,0
• Stabilität: Stabil in wässrigen Puffern: ∼ pH 7,2 ohne Ca²⁺ oder Mg²⁺

Trägerproteine sind große, komplexe Moleküle, die nach Injektion eine Immunantwort auslösen. Wenn Antikörper hergestellt werden sollen, die spezifisch auf kleine Antigene (z. B. Peptide oder Arzneimittelverbindungen) reagieren, dann müssen diese Haptene kovalent an ein größeres, komplexeres Molekül (in der Regel ein Protein) gebunden (konjugiert) werden, um ihnen eine immunogene Wirkung zu verleihen. Trägerproteine werden auf der Grundlage der Immunogenität, Löslichkeit und der Frage ausgewählt, ob ein angemessenes Niveau der Hapten-Träger-Konjugation erreicht werden kann.

Blue Carrier Protein ist ein speziell aufgereinigtes Hämocyanin aus der Molluskenart Concholepas concholepas. Das CCH-Protein besitzt zwei sehr große Polypeptiduntereinheiten (404/351 kDa), die auch in Abwesenheit von divalenten Kationen eine extrem stabile heterodidekamere Struktur bilden. (Im Gegensatz dazu ist KLH weniger stabil und bildet eine lösliche homodidekamere Struktur.) Die komplexe molekulare Anordnung der CCH-Untereinheiten besitzt verschiedene wiederholte Antigenstrukturen, die eine starke, von T- und B-Lymphozyten vermittelte Immunantwort hervorrufen.

Die komplexe molekulare Anordnung der CCH-Untereinheiten besitzt verschiedene wiederholte Antigenstrukturen, die eine starke, von T- und B-Lymphozyten vermittelte Immunantwort hervorrufen. Außerdem liegen Hinweise aus Studien vor, dass die starke DTH-Immunantwort, die Haemocyanine in Tieren und Menschen hervorrufen, bei bestimmten Krebserkrankungen eine positive therapeutische Wirkung besitzt. Neu entwickelte Immuntherapien gegen Krebs machen sich die einzigartigen immunogenen Eigenschaften von Hämocyaninen bei der Entwicklung von neuartigen konjugierten Impfstoffen zur Behandlung von neu auftretenden Erkrankungen zunutze.

Der Carbodiimid-Crosslinker EDC konjugiert Haptene mit Carboxylgruppen (z. B. am C-Terminus des Peptidantigens) mit dem BSA-Trägerprotein. Diese Methode der Immunogenzubereitung eignet sich ideal für Peptidantigene mit wenigen oder gar keinen Asparaginsäure- und Glutaminsäureresten (Carboxylaten) und Lysinresten (primäre Amine) im zentralen Teil der primären Sequenz. Da Peptide sowohl Carboxylate als auch Amine enthalten, führt die Konjugation mit EDC zu einer unterschiedlichen Polymerisierung und zufälligen Ausrichtung an den Bindungsstellen am Trägerprotein. Damit wird gewöhnlich nicht nur eine hohe Beladung des Trägerproteins mit Antigen, sondern auch eine Präsentation in alle möglichen Richtungen erreicht, was die Antikörperproduktion fördert. Allerdings ist es möglich, dass wichtige (d. h. erwünschte) Epitope in der Sequenz des Antigenpeptids bei der EDC-vermittelten Konjugation blockiert werden, wenn die betroffenen Regionen primäre Amine (Lysinreste) oder Carboxylate (Asparaginsäure- und Glutaminsäurereste) enthalten. Verwenden Sie in diesen Fällen entweder einen homobifunktionalen aminreaktiven Crosslinker mit dem gereinigten Blue Carrier in Phosphatpuffer oder synthetisieren Sie das Peptid mit einem einzelnen terminalen Cystein, und verwenden Sie ein Kit mit Maleimid-aktiviertem Blue Carrier, um das Trägerproteinkonjugat zuzubereiten.

Weitere Produktdaten
• Trägerprotein-Aktivierungs- und Konjugationsdaten für die Immunogenzubereitung

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