Pierce™ Classic Magnetic IP/Co-IP Kit

Das Thermo Scientific Pierce Classic Magnetic IP/Co-IP Kit ermöglicht eine hocheffektive und effiziente Immunpräzipitation (IP) und Co-Immunpräzipitation (Co-IP) von Antigenen und Protein-Komplexen mit weniger als 10 µg Antikörper und einem magnetischen Separator.

Merkmale des Classic Magnetic IP/Co-IP Kits:

• Kompatibel: Magnet-Beads auf der Basis von rekombinantem Protein A/G gewährleisten die Kompatibilität mit den meisten primären Antikörpern, ob von Maus oder Kaninchen
• Schnell: Immunpräzipitation in nur 30 Minuten, um den Hintergrund zu reduzieren und die Erfassung von transienten Proteinkomplexen zu verbessern
• Reinigung: immobilisieren Sie Ihren Antikörper, um eine Kontamination Ihres Eluats zu verhindern
• Resistent: kein Auslaugen von Protein A/G bei Vorhandensein von Detergenzien, pH-Puffern mit niedrigem pH-Wert oder gängigen Massenspektrometrie-Lösungsmitteln
• Effizient: Immunpräzipitation mit der Hälfte des empfohlenen Volumens an Magnetpartikeln im Vergleich zu anderen Magnet-Beads
• Praktisch: das umfassende Co-IP-Kit enthält die Magnet-Beads und alle wesentlichen Puffer für die Durchführung von Immunpräzipitationsexperimenten

. Dieses Immunpräzipitationskit verwendet hochwertige Thermo Scientific Pierce Protein A/G Magnet-Beads und optimierte Puffer sowie ein flexibles Protokoll, um mit manuellen oder automatisierten Magnettrennungstools eine IP- oder Co-IP-Hochleistungslösung zu erreichen. Der optimierte Lyse-/Waschpuffer optimiert die Ausbeute und effiziente Bindung von Antikörper-Antigen- und Co-IP-Interaktionen. Der relativ sanfte Elutionspuffer mit niedrigem pH-Wert dissoziiert den gebundenen Immunkomplex vom Protein A/G. Alternativ bietet der im Lieferumfang enthaltene Probenpuffer zur Spurenmarkierung eine schnelle, denaturierende Elution für die direkte SDS-PAGE-Analyse von IP-Produkten

Umfasst:
Pierce Protein A/G Magnet-Beads, Lyse-/Waschpuffer, Elutionspuffer, Neutralisationspuffer und Probenladepuffer

Die Immunpräzipitation mit magnetischen Partikeln erfolgt ähnlich wie IP mit gekörnter Agarose, mit der Ausnahme, dass Trennungen mit einem Magneten statt durch Zentrifugation durchgeführt werden. Der spezifische Antikörper wird zuerst der Probe hinzugefügt, um einen Immunkomplex zu bilden, der dann an die Magnet-Beads gebunden wird. Der Komplex wird gewaschen, um nicht gebundenes Material zu entfernen, und ein Elutionspuffer mit niedrigem pH-Wert trennt den gebundenen Immunkomplex vom Protein A/G. Alternativ ist der Probenpuffer zur Spurenmarkierung zur Dissoziation unter Verwendung von Denaturierungsbedingungen oder für die nachfolgende Probenvorbereitung für die SDS-PAGE-Analyse enthalten. Das Kit enthält Thermo Scientific Pierce Protein A/G Magnet-Beads für die schnelle und bequeme magnetische Isolierung von Antigenen und optimierte Puffer für hohe Antigenausbeute. Die Beads werden manuell mit einem Magnetständer oder durch Automatisierung mit einem Gerät wie dem Thermo Scientific KingFisher Flex Instrument aus der Lösung entfernt.

Es ist allgemein bekannt, dass längere Inkubationszeiten von Antikörper-Proben (2 Stunden bis über Nacht) in IP-Assays meist höhere Ausbeuten bieten. Es wird oft angenommen, dass diese größere Ausbeute mit erhöhtem Hintergrund kommt. Unsere Forscher haben festgestellt, dass die Antikörper-Probe-Bindung über Nacht, gefolgt von Immunpräzipitation mit dem Pierce Classic Magnetic IP/Co-IP Kit, die Ausbeute tendenziell erhöht, den Hintergrund jedoch nicht erhöht. Daher empfehlen wir, dass die Forscher diesen Bindungsschritt möglichst für mindestens 1 Stunde durchführen.

Protokoll-Zusammenfassung:
• Inkubieren Sie das Zelllysat mit dem IP-Antikörper für 1 bis 2 Stunden bei Raumtemperatur oder über Nacht bei 4ºC.
• Binden Sie einen Antigen-Antikörper-Komplex an Protein A/G-Magnet-Beads für 1 Stunde bei Raumtemperatur.
• Waschen Sie die Beads zweimal mit IP-Lyse/Waschpuffer und einmal mit gereinigtem Wasser.
• Eluieren Sie den Antigen-Antikörper-Komplex.

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