Pierce™ Antibody Biotinylation Kit for IP

Das Thermo Scientific™ Pierce™ Antikörper-Biotinylierungs-Kit für IP bietet Biotinylierungs-Reagenzien speziell für die Markierung von primären Antikörpern in Immunpräzipitations-Anwendungen.

• Optimiert für IP—Reagenzien und Protokolle, die speziell für die Antikörpermarkierung in Immunpräzipitationsanwendungen entwickelt wurden
• Anwenderfreundlich—die Kitkonfiguration wurde speziell für 50 – 200 μg Antikörper in einer 100 μl-Reaktion optimiert; Entsalzungssäulen werden bereitgestellt, um überschüssiges Biotinylierungsreagenz nach der Markierung zu entfernen
• Amin-reaktiv—reagiert mit primären Aminen (-NH2) von Antikörpern
• Erhöhte Löslichkeit—Pegylierung verbessert die Wasserlöslichkeit des biotinylierten Antikörpers und verhindert die Aggregation bei Lagerung
• Reduzierte sterische Hemmung—längerer Spacerarm (29 Ångström) minimiert die sterische Hinderung bei Bindung an Avidin-Moleküle

Die Reagenzien für das Pierce Antikörperbiotinylierungskit wurden für Biotin-markierte Antikörper für IP- und Co-IP-Reaktionen optimiert und validiert. Die Bestimmung der optimalen Anzahl der Biotine, die an das Zielmolekül binden sollen, ist eine der größten Herausforderungen der Biotinylierung. Bei IP- und Co-IP-Anwendungen führt eine zu hohe Anzahl von Biotinen zur reduzierten Affinität für das Ziel-Antigen, während zu wenige Biotine zum Auslaugen der Antikörper nach der Elution des Ziel-Antigens führen. Das Biotinkennzeichnungsverfahren im Pierce Antikörperbiotinylierungskit für IP wurde speziell entwickelt, um dieser Herausforderung gerecht zu werden.

Das Kit enthält genügend Reagenzien, um 50 – 200 µg Antikörper in einem 100 µl-Reaktionsvolumen für acht Proben zu markieren. Das NHS-PEG4-Biotin-Kennzeichnungsreagenz enthält eine aminreaktive N-Hydroxysuccinimidester (NHS)-Gruppe und einen wasserlöslichen PEG4-Spacer für die optimale Kennzeichnung und wird in anwenderfreundlichen Einweg-Mikroröhrchen geliefert. Sowohl die Kennzeichnungseffizienz des Biotinylierungsreagenz als auch die Bindungsaffinität der markierten Antikörper wurden unter Anwendung von monoklonalen Maus- (IgG1, IgG2), polyklonalen Kaninchen- und monoklonalen Kaninchen-Antikörpern validiert. Zeba™ Entsalzungs-Spin-Säulen dienen der einfachen und effizienten Entfernung von Salzen und überschüssigem Biotin.

Anwendungen:
• IP und Co-IP
• IP und Co-IP für Massenspektrometrieanwendungen
• Antikörperanhaftung an Streptavidin-Agarose und magnetische Träger