Click-iT™ EdU Colorimetric IHC Detection Kit

Das Click-iT™ EdU kolorimetrische IHC (Immunhistochemie)-Detektionskit ist eine überlegene Alternative zu herkömmlichen Methoden für den kolorimetrischen Nachweis der Zellproliferation in Gewebeschnitten. In diesem Assay wird 5-Ethinyl-2'-desoxyuridin (EdU), ein Nukleosid-Analogon von Thymidin mit Alkingruppe, in neu synthetisierte DNA integriert. Wenn Biotin, das eine Azidgruppe trägt, hinzugefügt wird, hängt eine kurze Click-Reaktion das Azid an die Alkingruppe des EdU-Moleküls an. Nach Zugabe von Streptavidin-Peroxidase und einem Peroxidase-Substrat erzeugt eine enzymatische Reaktion ein Signal, das mit Lichtmikroskopie erkannt und für zukünftige Analysen gespeichert werden kann.

Weitere Tools für den bildbasierten Nachweis von Proliferationszellen >

• Optimiert – Ermöglicht den kolorimetrischen Nachweis von Proliferationszellen in Gewebe- oder Zellproben
• Effizient – Keine Denaturierungsschritte oder harsche Behandlung erforderlich
• Robust – Verbesserte Erhaltung der Zellmorphologie bietet inhaltlich aussagekräftige Ergebnisse
• Gleichbleibend – Nicht von variablen Antikörper-Chargen abhängig
• Einfach – So konzipiert, dass es mit weniger Zeitaufwand als herkömmliche Methoden durchgehend funktioniert

Traditionelle Methoden liefern inkonsistente Ergebnisse
Die Messung von Veränderungen der Zellproliferation ist eine grundlegende Methode für die Beurteilung der Zellgesundheit, die Bestimmung der Genotoxizität und die Bewertung der Krebsmedikamentenforschung. Die präziseste Methode ist die direkte Messung der DNA-Synthese. Die traditionelle Methode nutzt das Nukleosid-Analogon 5-Brom-2'-Desoxyuridin (BrdU), ein Nukleosid-Analogon von Thymidin, das in neu transkribierte DNA eingebaut wird. Nach dem Einbau werden die Proben mit aggressiven Methoden behandelt (HCL, Wärme oder Enzyme), um die DNA zu denaturieren und die BrdU-Moleküle für den Nachweis durch Anti-BrdU-Antikörper zu exponieren. Diese aggressiven Behandlungen können die Probenintegrität, Zellmorphologie und Bildqualität beeinträchtigen. Darüber hinaus können fertigungsbedingte Variabilität, unspezifische Bindung und Kreuzreaktivität zu inkonsistenten Ergebnissen führen.

Vorteile gegenüber anderen Assays
Das Click-iT EDU Colorimetric IHC Detection Kit bietet viele Vorteile gegenüber herkömmlichen Methoden wie dem BrdU Assay. Die geringe Größe des Biotin-Azid-Anteils ermöglicht einen effizienten Nachweis der eingebauten EdU unter milden Bedingungen. BrdU-Assays erfordern dagegen aggressive Denaturierungsmethoden mit HCl und/oder hitzeinduzierter Epitopwiederfindung (HIER). Im Gegensatz zum BrdU-Assay, der auf Antikörpern beruht, die manchmal eine unspezifische Bindung aufweisen können, verwendet das Click-iT EDU Colorimetric IHC Detection Kit einen bioorthogonales (biologisch einzigartiges) Anteil — daraus ergibt sich ein niedriges Hintergrundsignal, eine hohe Detektionssensitivität und keine Kreuzreaktivität.

Das Kit enthält alle Komponenten, die zum Nachweis des eingebauten EdU in formalinfixierten, paraffineingebetteten (FFPE) Gewebeproben benötigt werden. Das Kit enthält genügend Reagenzien für die Markierung von fünfzig (50) 18 x 18 mm Deckgläsern mit 100 μl Reaktionspuffer pro Test.