Click-iT™ EdU Colorimetric IHC Detection Kit

El kit de detección IHC (inmunohistoquímica) colorimétrica EdU Click-iT™ es una alternativa superior a los métodos tradicionales para la detección colorimétrica de células proliferantes dentro de secciones de tejido. En este ensayo, se incorpora 5-etinil-2'-desoxiuridina (EdU), un análogo nucleósido de la timidina que contiene un resto alquino, en el ADN recién sintetizado. Cuando se agrega biotina, que contiene un grupo de azidas, una breve reacción de clic une la azida al resto alquino en la molécula de EdU. Tras la adición de estreptadivina–peroxidasa y un sustrato de peroxidasa, una reacción enzimática genera una señal que puede detectarse con microscopía óptica y almacenarse para análisis futuros.

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• Optimizado: permite la detección colorimétrica de células proliferantes en muestras de tejido o células
• Eficaz: no es necesario realizar pasos de desnaturalización ni tratamientos intensos
• Robusto: la preservación mejorada de la morfología celular y el entorno celular ofrece resultados ricos en contenido
• Coherente: no depende de lotes de anticuerpos variables para la detección
• Simple: diseñado para que funcione de forma coherente en menos tiempo que los métodos tradicionales

Los métodos tradicionales producen resultados incoherentes
La medición de los cambios en la proliferación celular es un método fundamental para evaluar la salud celular, determinar la genotoxicidad y evaluar la investigación de fármacos anticancerígenos. El método más preciso para llevar a cabo este procedimiento es mediante la medición directa de la síntesis de ADN. El método tradicional utiliza el análogo nucleósido 5-bromo-2'-desoxiuridina (BrdU), un análogo nucleósido de la timidina, que se incorpora al ADN recién transcrito. Tras la incorporación, las muestras se tratan con métodos intensos (HCl, calor o enzimas) para desnaturalizar el ADN y exponer las moléculas BrdU a la detección por parte de los anticuerpos anti-BrdU. Estos tratamientos agresivos pueden afectar negativamente a la integridad de la muestra, la morfología celular y la calidad de la imagen. Además, la variabilidad de fabricación, la unión no específica y los problemas de reactividad cruzada pueden dar lugar a resultados incoherentes.

Ventajas sobre otros ensayos
El Kit de detección de IHC colorimétrico EdU Click-iT ofrece muchas ventajas sobre los métodos tradicionales, como el ensayo BrdU. El pequeño tamaño del resto biotina-azida permite la detección eficaz de la EdU incorporada utilizando condiciones suaves. Por el contrario, los ensayos de BrdU requieren métodos de desnaturalización severos que utilizan HCl o recuperación de epítopos inducidos por calor (HIER). Además, a diferencia del ensayo de BrdU, que se basa en anticuerpos que a veces pueden presentar una unión no específica, el kit de detección de IHC colorimétrico EdU Click-iT utiliza un resto bioortogonal (biológicamente único), que da como resultado una señal de fondo baja, sensibilidades de detección altas y sin problemas de reactividad cruzada.

la EdU incorporada presente en muestras de tejido incrustadas en parafina y fijados con formol (FFPE). El kit incluye reactivos suficientes para marcar cincuenta (50) cubreobjetos de 18 x 18 mm utilizando 100 μl de reactivo de reacción por prueba.