Kit de síntesis de la primera cadena de ADNc Maxima H Minus

Thermo Scientific™

Kit de síntesis de la primera cadena de ADNc Maxima H Minus

Name: Kit de síntesis de la primera cadena de ADNc Maxima H Minus
SKU: K1651

El kit de síntesis de ADNc de primera cadena Thermo Scientific Maxima H Minus es un sistema completo que permiteMás información

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Número de catálogo	Incluye	N.º de reacciones
K1651	Kit only	20 reacciones
K1652	Kit only	100 reacciones
K1681	Kit with dsDNase	20 reacciones
K1682	Kit with dsDNase	100 reacciones

4 opciones

Número de catálogo K1651

Precio (MXN)

Incluye:

Kit only

N.º de reacciones:

20 reacciones

Pedido a granel o personalizado

El kit de síntesis de ADNc de primera cadena Thermo Scientific Maxima H Minus es un sistema completo que permite una síntesis muy eficiente de la primera cadena de ADNc.El kit emplea la transcriptasa inversa (RT) Maxima H Minus, una enzima avanzada derivada de la evolución in vitro de la RT M-MuLV.Esta enzima cuenta con el máximo grado de termoestabilidad entre los derivados de la RT M-MuLV y carece de actividad de ARNasa H.El kit de síntesis de la primera cadena de ADNc Maxima H Minus permite la síntesis de ADNc de gran longitud, de hasta 20 kb, a temperaturas elevadas (hasta 65 °C), con lo que sustituye las capacidades de otros sistemas para producir ADNc de longitud completa.Gracias a las elevadas tasas de síntesis, la reacción se puede completar en 30 minutos.

Aspectos destacados

• Aumento de las temperaturas de reacción: la primera cadena de ADNc se puede sintetizar a una temperatura de entre 42 y 65 °C
• Alto rendimiento de ADNc de primera cadena de longitud completa: con plantillas de ARN de hasta 20 kb
• Cebado flexible: oligo(dT)₁₈, hexámeros aleatorios o cebadores específicos del gen

Aplicaciones

• Síntesis de ADNc de primera cadena para RT-PCR y RT-qPCR
• Construcción de bibliotecas de ADNc
• Creación de sondas para hibridación
• Síntesis de ARN antidetección

Incluye

• El kit de síntesis de la primera cadena de ADNc Maxima H Minus contiene la mezcla de enzimas Maxima H Minus, oligo(dT)₁₈ hexámeros aleatorios o cebadores, tampón 5X RT, mezcla de dNTP, y agua sin nucleasa.

Información adicional acerca de los componentes de reacción

• La mezcla de enzimas Maxima H Minus contiene transcriptasa inversa Maxima H Minus e inhibidores de la ARNasa RiboLock.El inhibidor de RNasa RiboLock es un protector eficaz de las plantillas de ARN frente a la degradación por ARNasas A, B y C a una temperatura hasta 55 °C.
•Con el kit se suministran cebadores oligo(dT)₁₈ y hexaméricos aleatorios.Los cebadores hexámeros aleatorios realizan uniones no específicas y se utilizan para sintetizar ADNc de todos los ARN de una población de ARN.El cebador oligo(dT)₁₈ se recuece de forma selectiva con el extremo 3' de ARN poli(A) y sintetiza únicamente ADNc del ARNm con extremo poli(A).El kit también permite la utilización de cebadores específicos de genes para cebar la síntesis a partir de una secuencia especificada.
•La mezcla de dNTP de 10 mm es una solución acuosa premezclada de dATP, dTTP, dCTP y dGTP.
•El agua libre de nucleasas se suministra para preparar la reacción y diluir el ADN de las muestras.La ausencia de endo-, exodesoxirribonucleasas, ribonucleasas y fosfatasas ha sido confirmada por pruebas de calidad apropiadas.

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Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.

Especificaciones

Tipo de producto finalPrimera cadena de ADNc

FormatoTubo

IncluyeKit only

N.º de reacciones20 reacciones

Temperatura óptima de reacciónDe 50 °C a 55 °C

CantidadEach

Formato de reacciónComponentes separados

Tipo de reactivoTranscripción reversa

Transcriptasa inversaMaxima H Minus

Actividad de la ribonucleasa HReducido

Condiciones de envíoDry Ice

Tamaño (producto final)Hasta 20 kb

Material de partidaARN

TécnicaTranscripción reversa

Para utilizar con (aplicación)Real Time PCR (qPCR), RT-PCR

GC-Rich PCR PerformanceHigh

Velocidad de reacción30 min

Unit SizeEach

Contenido y almacenamiento

El kit de síntesis de la primera cadena de ADNc Maxima H Minus contiene la mezcla de enzimas Maxima H Minus (incluye transcriptasa reversa Maxima H Minus e inhibidor RiboLock RNase), Oligo(DT)₁₈ y primer hexaméricos aleatorios, tampón 5 X RT, dNTP Mix, y agua libre de nucleasas.
Almacenar a -20 °C.

Preguntas frecuentes

When should I choose regular RevertAid RT or Maxima RT vs. RevertAid H-minus RT or Maxima H-minus RT?

It is generally beneficial to minimize RNase H activity when aiming to produce long transcripts for cDNA cloning. RNase H degrades RNA from RNA-DNA duplexes, which can result in truncated cDNA during reverse transcription of long mRNA. We also recommended using RNase H-minus RTs for template-independent addition of C nucleotides.

Do Thermo Scientific reverse transcriptases (RevertAid RT, RevertAid H-minus RT, Maxima RT, and Maxima H-minus RT) possess terminal deoxynucleotidyl (TdT) activity?

All Thermo Scientific reverse transcriptases possess intrinsic TdT activity although at varying degrees depending upon the reaction conditions. For addition of template-independent C nucleotides (as for SMART and RACE experiments), this specific TdT activity can be induced by Mn2+. We would recommend Maxima H- or RevertAid H- minus RTs for this purpose.

Is it preferable to use elevated temperature in the RT reaction when using Maxima reverse transcriptases?

cDNA synthesis at higher temperatures ensures successful transcription of RNA with high levels of secondary structure, reducing issues of primer access to template. Therefore, we do recommend to use RT enzymes with high thermostability, e.g. Maxima and Maxima H Minus Reverse Transcriptases, which provide higher yields of full-length cDNA, better sensitivity, and successful transcription of GC-rich templates.

What steps should I take while performing first strand cDNA synthesis using low purity template (e.g., inhibitors in RNA sample)?

Trace amounts of reagents used in RNA purification protocols may remain in solution and inhibit first-strand synthesis, e.g., SDS, EDTA, guanidine salts, phosphate, pyrophosphate, polyamines, spermidine. To remove trace contaminants, we recommend re-precipitating the RNA with ethanol and washing the pellet with 75% ethanol, or re-purifying the RNA.

For reverse transcription, how important is the quality of RNA template?

RNA purity and integrity are essential for synthesis and quantification of cDNA. Always assess the integrity of RNA prior to cDNA synthesis. Use freshly prepared RNA. Multiple freeze/thaw cycles of the RNA sample and synthesized cDNA is not recommended. Avoid RNase contamination and discard low quality RNA.

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