Beim Thermo Scientific Maxima H Minus First Strand cDNA Synthesis Kit handelt es sich um ein Komplettsystem für die hocheffiziente Synthese von Erststrang-cDNA. Im Kit ist Maxima H Minus reverse Transkriptase (RT) enthalten – ein leistungsstarkes Enzym, das durch In-vitro-Evolution von M-MuLV-RT hergestellt wird. Das Enzym zeichnet sich durch die höchste Thermostabilität unter den M-MuLV RT-Derivaten aus und hat keine RNase H-Aktivität. Das Maxima H Minus First Strand cDNA Synthesis Kit ermöglicht die Synthese von langen cDNAs bis 20 kb bei erhöhten Temperaturen (bis 65 °C) und übertrifft die Fähigkeit anderer Systeme zur Herstellung von Volllängen-cDNA. Durch höhere Syntheseraten kann die Reaktion in 30 Minuten abgeschlossen werden.

Besondere Merkmale

• Höhere Reaktionstemperatur – der erste Strang der cDNA kann innerhalb des Temperaturbereichs von 42 bis 65 °C synthetisiert werden
• Hohe Ausbeute an Erststrang-cDNA in voller Länge – mit RNA-Templates bis zu 20 kb
• Flexibles Priming – Oligo(dT)₁₈-, Random-Hexamer- oder genspezifische Primer

Anwendungen

• Erststrang-cDNA-Synthese für RT-PCR
• Erstellung von cDNA-Bibliotheken
• Erstellung von Sonden für die Hybridisierung
• Synthese von Antisense-RNA

Beinhaltet

• Das Maxima H Minus First Strand cDNA Synthesis Kit enthält Maxima H Minus Enzymgemisch, Oligo(dT)₁₈- und Random-Hexamer-Primer, 5X RT-Puffer, dNTP-Gemisch und nukleasefreies Wasser.

Weitere Informationen zu den Reaktionskomponenten

• Das Maxima H Minus Enzymgemisch enthält Maxima H Minus reverse Transkriptase und RiboLock RNase-Inhibitor. Der RiboLock RNase-Inhibitor schützt RNA-Templates bei Temperaturen bis zu 55 °C wirksam vor dem Abbau durch die RNasen A, B und C.
• Oligo(dT)₁₈- und Random-Hexamer-Primer sind im Kit enthalten. Die Random-Hexamer-Primer binden nicht spezifisch und werden verwendet, um cDNA von allen RNAs in einer RNA-Gesamtpopulation zu synthetisieren. Der Oligo(dT)₁₈-Primer bindet selektiv an das 3'-Ende der Poly(A)-RNA, was dazu führt, dass cDNA nur von mRNA mit Poly(A)-Schwanz synthetisiert wird. Für die Synthese einer bestimmten Sequenz können zudem genspezifische Primer eingesetzt werden.
• Das 10 mM dNTP-Gemisch ist eine vorgemischte, wässrige Lösung aus dATP, dTTP, dCTP und dGTP
• Nukleasefreies Wasser zur Reaktionsvorbereitung und Verdünnung der Proben-DNA ist im Lieferumfang enthalten. Mithilfe geeigneter Qualitätsprüfungen wurde sichergestellt, dass keine Endo- und Exodesoxyribonukleasen, Ribonukleasen sowie Phosphatasen vorhanden sind.

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