Solución TCEP Bond-Breaker™, pH neutro

La solución TCEP Bond-Breaker de pH neutro Thermo Scientific es una solución estable de 0,5 M de compuesto TCEP basado en fosfina sin tioles, útil como solución madre 10x para la adición a tampones de carga de muestras SDS-PAGE para reducir enlaces de disulfuro de proteínas.

Características de la solución TCEP Bond-Breaker de pH neutro:

• Inodoro: a diferencia de DTT y β-ME, TCEP es inodoro, lo que contribuye a un entorno de laboratorio más saludable
• Eficaz: entre 5 y 50 mM de TCEP reducen la mayoría de los enlaces de disulfuro de péptidos o proteínas en pocos minutos (es decir, es tan eficaz como DTT)
• Específico: reducción específica y completa de los disulfuros alquílicos solubles en agua más estables
• Rápido: reduce los disulfuros de las proteínas a temperatura ambiente y a pH 5 en menos de cinco minutos
• Estable: resistente a la oxidación del aire; no volátil y no reactivo a otros grupos funcionales encontrados en proteínas
• Versátil: reduce péptidos y proteínas en un amplio intervalo de pH, sal, detergente y condiciones de temperatura
• Compatible: no es necesaria la eliminación del agente reductor antes de la mayoría de las aplicaciones (por ejemplo, la purificación de proteínas etiquetadas con histidina, las conjugaciones de maleimida), debido a que TCEP no contiene grupos de sulfhidrilo

La solución TCEP Bond-Breaker es un agente reductor potente, inodoro y sin tiol con muchas aplicaciones en proteínas y otras investigaciones que implican la reducción de enlaces de disulfuro. Este producto es un reemplazo eficaz y práctico para el b-mercaptoetanol o DTT en tampones de muestra SDS-PAGE. El pH neutro de este reactivo proporciona bandas nítidas y evita exponer las proteínas al ácido fuerte de TCEP·HCl, lo que puede resultar en hidrólisis y la modificación de carbohidratos.

Consideraciones para el uso de la solución TCEP Bond-Breaker:
• Se produce una reducción en una amplia gama de pH (pH 4,0 a 9,0) y de temperatura (de 5 a 95 °C)
• La mayoría de las proteínas se reducen de manera eficiente sin un desnaturalizante. Sin embargo, la adición de un desnaturalizante como guanidina·HCl puede ayudar a exponer disulfuros internos al TCEP inmovilizado
• No se recomienda utilizar urea como desnaturalizante, ya que forma cianatos que reaccionan a grupos de sulfhidrilos
• No incluya metales en contacto con la solución TCEP, ya que esto reduciría la actividad del TCEP.
• Si se incluyen de 5 a 20 mM de EDTA en el tampón de muestra durante la reducción, ayuda a prevenir la reoxidación de los grupos de sulfhidrilos por metales divalentes, como Zn 2+, Cu 2+ y Mg 2+.
• La muestra reducida debe usarse inmediatamente después de la reducción, ya que los disulfidos se volverán a formar con el tiempo.

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