Pierce™ Direct Magnetic IP/Co-IP Kit

El kit IP/Co-IP magnético directo Thermo Scientific Pierce utiliza la química NHS para inmovilizar covalentemente anticuerpos IP en gránulos magnéticos para una inmunoprecipitación y coinmunoprecipitación eficaces.

La IP magnética con química NHS es cómoda y permite la inmovilización del anticuerpo IP de cualquier especie y subtipo sin las variaciones en la eficacia de acoplamiento observadas con la proteína A y la proteína G. El anticuerpo IP se une covalentemente para que las proteínas diana o los complejos de proteína co-IP puedan ser eluidos y analizados sin contaminación por anticuerpos. El kit contiene un protocolo optimizado y todos los tampones y reactivos necesarios para el acoplamiento de anticuerpos y IP de alto rendimiento o co-IP mediante soportes magnéticos manuales o plataformas automatizadas como los instrumentos Thermo Scientific KingFisher.

Características del kit IP/Co-IP magnético directo:

• IP libre de anticuerpos: el anticuerpo se une irreversiblemente a los gránulos magnéticos, lo que resulta en una coelución insignificante de anticuerpos intactos o cadenas pesadas y ligeras con el antígeno purificado
• Rápido: conjugación de anticuerpo completa e inmunoprecipitación en menos de 4 horas
• Cómodo: el kit IP/Co-IP contiene gránulos magnéticos y todos los tampones esenciales para una inmunoprecipitación óptima
• Uso compatible con anticuerpos: puede usarse con cualquier especie, clase o isotipo de anticuerpos
• Baja adherencia no específica: la superficie del gránulo está prebloqueada y todos los grupos de éster NHS no reaccionados están completamente cerrados
• Compatible con protocolos: acoplamiento de proteínas compatible con protocolos a los gránulos y la inmunoprecipitación se pueden realizar manualmente o por automatización (por ejemplo, instrumentos Thermo Scientific KingFisher)
• Escalable: use solo la cantidad de anticuerpo necesaria para un solo experimento de IP o para preparar una mayor cantidad de gránulos magnéticos de anticuerpo para múltiples experimentos

El protocolo para el kit IP/Co-IP directo Pierce conjuga el anticuerpo de IP a Gránulos magnéticos activados por NHS Pierce a través de la química del éster de NHS. A continuación, se incuban los gránulos enlazados con anticuerpos con tampón de enfriamiento para bloquear los sitios de NHS activos restantes. Los gránulos preparados enlazados con anticuerpos se incuban con lisado celular o extracto de tejido que contenga el antígeno proteico de interés, lo que permite la formación del complejo antígeno:anticuerpo. Los gránulos se lavan para eliminar el material no ligado y se utiliza un tampón de elución de pH bajo para disociar el antígeno ligado del gránulo unido a anticuerpos. El tampón de neutralización se incluye para evitar la precipitación del antígeno aislado y para garantizar la actividad de las proteínas en las aplicaciones posteriores. El tampón de muestras de marcadores para carriles se incluye para preparar muestras para el análisis de SDS-PAGE. El protocolo está optimizado para 2 a 10 μg de anticuerpo IP por ensayo. Para obtener una producción óptima del co-IP, utilice 10μ g de anticuerpo. Los gránulos se pueden procesar manualmente mediante un soporte magnético o mediante automatización con un instrumento como el Thermo Scientific KingFisher Flex.

El IP tradicional con gránulos magnéticos de proteína A/G, que implica un acoplamiento pasivo y no covalente del anticuerpo con proteína A/G, normalmente proporciona una producción de antígeno más alta que los protocolos de IP que implican la unión covalente del anticuerpo a gránulos magnéticos a través del entrecruzamiento o la química del éster NHS. La fijación covalente inevitablemente causa la pérdida de algunos sitios de unión de anticuerpos funcionales. Para superar esta limitación con la química del NHS, puede ser necesario utilizar cantidades mayores de anticuerpo de IP en el método de IP directa que en el método de IP tradicional. La ventaja de la inmunoprecipitación con el anticuerpo IP covalentemente unido a gránulo magnético son los Western blots y los geles desprovistos de bandas de anticuerpos interferentes.

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