Dynabeads Protein G sind einheitliche, 2,8 μm große superparamagnetische Beads mit rekombinantem Protein G (∼ 17 kDa), das kovalent an die Oberfläche gekoppelt ist. Dynabeads Protein G bieten eine überlegene Alternative zu Sepharose- oder Agarose-Suspensionen für die Immunpräzipitation (IP). Sie können sowohl in manuellen als auch automatisierten Protokollen angewendet werden.

• IP in unter 40 Minuten
• Hohe Zielproteinausbeute bei geringem Antikörperverbrauch
• Sehr geringe unspezifische Bindung mit hohem Signal-Rausch-Verhältnis
• Keine Säulen, Zentrifugationsschritte oder zeitraubende Vorreinigung erforderlich
• Hohe Reproduzierbarkeit und hoher Durchsatz, kompatibel mit KingFisher Geräten

Die manuelle Trennung mit Dynabeads ist schnell und einfach durchzuführen
Das manuelle Protokoll ist einfach und kann in unter 40 Minuten durchgeführt werden. Zunächst werden die Antikörper gegen das Zielprotein 10 Minuten lang mit dem Dynabeads Protein G in einem Röhrchen inkubiert. Überschüssige Antikörper werden durch Waschen entfernt, indem das Röhrchen in einen DynaMag Magneten eingesetzt und der Überstand entfernt wird. Die antikörperbeschichteten Beads können dann für eine Vielzahl von Downstream-Prozessen verwendet werden, einschließlich IP, Co-IP, Chromatin IP (ChIP), RNA IP (RIP), kleinvolumige IgG-Aufreinigung und Proteinaufreinigung. Das gebundene Material lässt sich aufgrund der einzigartigen magnetischen Eigenschaften der Dynabeads leicht mit einem DynaMag Magnet sammeln. Das rekombinante Protein G an den Beads besitzt keine Bindungsstellen für Albumin, sodass Albumin nicht gleichzeitig gereinigt wird. Die IP ist schnell und bietet eine hohe Ausbeute, hohe Reproduzierbarkeit und sehr wenig unspezifische Bindung, sodass keine Vorreinigung erforderlich ist.

Die automatische Dynabeads-Trennung erhöht den Durchsatz und reduziert den Arbeitsaufwand
Wenn Sie mit mehreren Proben parallel arbeiten, steigen die Anzahl der Waschschritte und der Arbeitsaufwand proportional zur Anzahl der Proben. Pipettieren und sonstige manuelle Handhabung sind in der Regel uneinheitlicher als automatisierte Verfahren, wenn mit vielen Proben gleichzeitig gearbeitet wird. Zur besseren Handhabung von mittleren bis hohen Probenzahlen, zur Verringerung des Arbeitsaufwands und zur Sicherung einer hohen Reproduzierbarkeit haben wir IP-Protokolle für die Geräte KingFisher Flex und KingFisher Duo Prime entwickelt. Die automatisierten Protokolle spiegeln die manuellen Protokolle, um eine gleich hohe Zielproteinausbeute und die gleiche geringe unspezifische Bindung und hohe Reproduzierbarkeit zu erzielen. Unabhängig davon, ob Sie mit 10 oder 96 Proben arbeiten, dauert das IP-Protokoll weniger als 40 Minuten. Laden Sie einfach die Reagenzien auf die Platten, drücken Sie die Taste “Start” und die IP ist fertig, bis Sie sich auf die nachfolgende Analyse vorbereitet haben. Eine gewisse Optimierung (z. B. Inkubationszeiten) kann – abhängig vom Antikörper und der Abundanz und/oder Spezifität des Zielproteins – erforderlich sein.

• Verwenden Sie das KingFisher Duo Gerät für niedrige bis mittleren Durchsätze (1 bis 12 Proben/Lauf)
• Verwenden Sie das KingFisher Flex Gerät für hohe Durchsätze (12 bis 96 Proben/Lauf)
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Durch die schonende Trennung werden die Proteine nur geringen physischen Belastungen ausgesetzt
Die magnetische Trennungstechnologie von Dynabeads Protein A ist schnell und schonend und strapaziert die Zielproteine nur minimal. Dies ermöglicht eine Isolierung und Konzentration labiler Komposita, die andernfalls bei langen Inkubationszeiten von Proteasen geschädigt werden könnten. Native Proteinkonformation und große Proteinkomplexe bleiben erhalten.

Bindungsstärke und -kapazität
Dynabeads Protein G ermöglichen die Isolierung der meisten Immunglobuline (Ig) von Säugetieren. Die Menge des erfassten Ig hängt von der Ig-Konzentration in der Erstprobe sowie von der Art und dem Ursprung des Ig ab. 100 μl Dynabeads Protein G isolieren ca. 25 bis 30 μg humanes IgG aus einer Probe mit 20 bis 200 μg IgG/ml. Die dominierende Fc-Bindung ermöglicht eine optimale Ig-Ausrichtung. Die Antikörper binden an die äußere glatte Oberfläche der Beads, sind also nicht in großen Poren wie bei Sepharose/Agarose-Beads eingeschlossen. Alle Antikörper sind für die Proteinbindung verfügbar, daher sind geringe Mengen an Antikörpern erforderlich, während gleichzeitig die gleiche hohe Ausbeute an Zielprotein erzielt wird. Die glatte Bead-Oberfläche ist auch für die geringe unspezifische Bindung verantwortlich, für die Dynabeads bekannt sind.

Weitere Informationen zu Dynabeads
• Dynabeads Protein A sind auch als „gebrauchsfertiges“ Kit mit Puffern erhältlich
• Sehen Sie sich Auswahlleitfäden, Daten und Referenzen für die Immunpräzipitation an
• Magnete für die Trennung mittels Dynabeads ansehen
• Hier finden Sie Dynabeads Produkte für andere Anwendungen

OEM-Kauf
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*Sepharose ist eine Marke von GE Healthcare Bio-Sciences AB.