CellsDirect™ One-Step qRT-PCR Kit
CellsDirect™ One-Step qRT-PCR Kit
Invitrogen™

CellsDirect™ One-Step qRT-PCR Kit

Das CellsDirect™ One-Step qRT-PCR Kit sorgt für höchst empfindliche und spezifische Echtzeit-qPCR-Ergebnisse direkt aus Zellen und ohne RNA-Aufreinigungsschritt.Merkmale des CellsDirect™Weitere Informationen
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KatalognummerAnzahl Reaktionen
11753500500 Reaktionen
11753100100 Reaktionen
Katalognummer 11753500
Preis (EUR)
4.505,00
Each
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Anzahl Reaktionen:
500 Reaktionen
Preis (EUR)
4.505,00
Each
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Das CellsDirect™ One-Step qRT-PCR Kit sorgt für höchst empfindliche und spezifische Echtzeit-qPCR-Ergebnisse direkt aus Zellen und ohne RNA-Aufreinigungsschritt.

Merkmale des CellsDirect™ One-Step qRT-PCR Kit sind u. a.:

Effizienz – Bietet erhebliche Zeit- und Kosteneinsparungen für höheren Durchsatz
Anwenderfreundlichkeit – Enzymgemisch sowohl mit SuperScript™ III Reverse Transkriptase als auch Platinum™ Taq DNA-Polymerase
Empfindlichkeit – Kein separater RNA-Isolierungsschritt für größere Empfindlichkeit dank weniger Probenverlusten
Breiter Detektionsbereich – Target-Detektion bei Proben mit einzelner Zelle bis zu 10.000 Zellen
Vielseitigkeit – Kompatibel mit einer Vielzahl von Zelllinien und Proben, die mittels Laser Capture Microdissection (LCM) erfasst wurden

Optimieren Sie Ihren Arbeitsablauf
Bei der herkömmlichen quantitativen Echtzeit-PCR (qRT-PCR) muss zuerst RNA aus Zellen in einem sehr zeitintensiven Verfahren isoliert werden, was zu Materialverlusten führen kann. Mit dem CellsDirect™ One-Step qRT-PCR Kit lysieren Sie die Zellen und fügen das vollständige Lysat direkt zu einer einstufigen qRT-PCR-Reaktion bei minimaler Handhabung und minimalem Probenverlust hinzu.

Ideal für Ihre qRT-PCR-Anwendung
Die CellsDirect™-Technologie ist für Genexpressionsstudien mit begrenzten Proben validiert. CellsDirect™ One-Step qRT-PCR Kits sind besonders für Anwendungen mit hohem Durchsatz durch Vermeidung von teuren, zeitaufwändigen RNA-Aufreinigungsschritten ausgelegt (siehe Abbildung). Das CellsDirect™ One-Step qRT-PCR Kit kann zudem zur Detektion genomischer DNA-Targets verwendet werden.

CellsDirect™ One-Step qRT-PCR Kits können zusammen mit Hydrolyse-Sonden (z. B. mit den fluorogenen Primern TaqMan™ oder LUX™) verwendet werden.

Hinweis: Dieses Kit enthält ein separates Röhrchen mit ROX™ Referenz-Farbstoff. Ein gleichwertiges Kit ( 11754-500 ) mit ROX™ Referenz-Farbstoff in zweifacher Reaktionsmischung ist ebenfalls verfügbar.
Nur für Forschungszwecke. Darf nicht für diagnostische Verfahren eingesetzt werden.
Specifications
Zur Verwendung mit (Geräte)7500 Fast System, 7500 System, BioRad iQ5, BioRad MyiQ, Corbett RotorGene, MJ Opticon, Stratagene Mx3000P, Stratagene Mx3005P, Stratagene Mx4000, BioRad iCycler iQ, Cepheid SmartCycler, MJ Chromo4, QuantStudio 3 und 5 Systeme, QuantStudio 6 und 7 Pro Systeme, QuantStudio 7 Flex System, QuantStudio 12k Flex System, QuantStudio 6 Flex System
Anzahl Reaktionen500 Reaktionen
ProduktlinieCellsDirect, Platinum, SuperScript
Menge500 Reaktionen
ProbentypZellen
Konzentration2X
NachweisverfahrenPrimer-Sonde
Zur Verwendung mit (Anwendung)RT-PCR
ReaktionsgeschwindigkeitSchnell oder standardmäßig
Unit SizeEach
Inhalt und Lagerung
• 10 ml Resuspensionspuffer
• 1 ml Lyseverstärker
• 2 × 1,25 ml DNase I, Amplifikationsgrad (1 U/µl)
• 800 µl 10X DNase I-Puffer
• 2 × 1 ml 25 mM EDTA
• 500 µl SuperScript™ III RT/Platinum™ Taq-Mix
• 12,5 ml 2X Reaktionsgemisch
• 1 ml 50 mM MgSO4
• 12,5 ml DEPC-behandeltes Wasser
• 10 µl HeLa Gesamt-RNA (10 ng/µl)
• 500 µl ROX™ Referenzfarbstoff (bei –20 °C im Dunkeln lagern)
Das Kit wird auf Trockeneis geliefert und sollte bei –20 °C gelagert werden

Häufig gestellte Fragen (FAQ)

What can I do to improve the sensitivity of my qPCR assay?

If you are targeting a low-abundance gene, you may have trouble getting Ct values in a good, reliable range (Ct > 32). To increase the sensitivity of the assay, you may want to consider the following:

- Increase the amount of RNA input into your reverse transcription reaction, if possible
- Increase the amount of cDNA in your qPCR reaction (20% by volume max)
- Try a different reverse transcription kit, such as our SuperScript VILO Master Mix, for the highest cDNA yield possible
- Consider trying a one-step or Cells-to-CT type workflow (depending on your sample type)

How do I set the baseline for my qPCR experiment?

Most times your instrument software can automatically set a proper baseline for your data. Check out our short video, Understanding Baselines, for more information on how to set them (https://www.youtube.com/watch?feature=player_embedded&v=5BjFAJHW-bE).

How do I set the threshold for my qPCR experiment?

In most cases your instrument software can automatically set a proper threshold for your data. Check out our short video, Understanding Thresholds, for more information on how to set them (https://www.youtube.com/watch?feature=player_embedded&v=H_xsuRQIM9M).

I am not getting any amplification with my TaqMan Assay or SYBR Green primer set. What is causing this?

There could be several reasons for no amplification from an assay or primer set. Please see these examples and suggested solutions in our Real-Time Troubleshooting Tool (https://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/pcr/real-time-pcr/qpcr-education/real-time-pcr-troubleshooting-tool/gene-expression-quantitation-troubleshooting/no-amplification.html) for more details.

I am getting amplification in my no-template control (NTC) wells in my qPCR experiment. What is causing this?

There could be several reasons for amplification in a NTC well. Please see these examples and suggested solutions in our Real-Time Troubleshooting Tool (https://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/pcr/real-time-pcr/qpcr-education/real-time-pcr-troubleshooting-tool/gene-expression-quantitation-troubleshooting/amplification-no-template-control.html) for more details.

Zitierungen und Referenzen (1)

Zitierungen und Referenzen
Abstract
Comparison of reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction methods and platforms for single cell gene expression analysis.
Authors:Fox BC, Devonshire AS, Baradez MO, Marshall D, Foy CA,
Journal:Anal Biochem
PubMed ID:22617801
Single cell gene expression analysis can provide insights into development and disease progression by profiling individual cellular responses as opposed to reporting the global average of a population. Reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction (RT-qPCR) is the  ... More